Localización de la expresión del gen CsSCL1 en embriones somáticos y zigóticos de castaño mediante hibridación in situ

Abstract

El gen CsSCL-1 (Castanea sativa SCARECROW-LIKE 1) caracterizado en nuestro laboratorio, presenta una elevada homología con genes que codifican proteínas de la familia GRAS. Estas proteínas son una familia de putativos factores de transcripción implicados en diferentes procesos de señalización y desarrollo en plantas. El gen CsSCL-1 se induce en brotes de castaño en respuesta a la aplicación de auxina y parece que juega un papel durante los estadíos tempranos de la formación de raíces adventicias. En un estudio previo, hemos analizado la expresión del gen mediante qRT-PCR durante el desarrollo de embriones somáticos y zigóticos de castaño. En los embriones zigóticos, los niveles relativos mas altos del transcrito se detectaron en óvulos con embriones en estados muy tempranos de desarrollo, alcanzando niveles 10 veces superiores a los de los embriones en estado cotiledonar. De manera similar los embriones somáticos en etapa globular presentaron al menos un nivel de expresión dos veces mayor que el de los embriones cotiledonares. El objetivo del presente trabajo es localizar la expresión espacio-temporal del gen CsSCL-1 mediante hibridación in situ, durante la embriogénesis somática y zigótica de castaño para determinar en qué tipo de tejidos tiene lugar la acumulación del transcrito. En el caso de embriones somáticos se utilizaron dos líneas embriogénicas mantenidas mediante embriogénesis secundaria, aislándose embriones en diferentes estados de desarrollo (globular, cotiledonar temprano y cotiledonar). El gen CsSCL-1 mostró una elevada expresión en los embriones globulares con una mayor acumulación en la protodermis. A medida que avanza la histodiferenciación de los embriones, el gen se expresa preferencialmente en el procambium y en el meristemo radicular, mostrando una ligera expresión en los cotiledones. Para el análisis realizado en los embriones zigóticos, se recogieron semanalmente (dos recogidas por semana), dentro de un intervalo de tiempo desde finales de Julio hasta finales de Septiembre, muestras de semillas inmaduras y maduras de castaño del mismo árbol. En las últimas semanas, en las que ya se observaba el embrión en estado cotiledonar avanzado, se aisló el eje embrionario. Los resultados preliminares de hibridación in situ muestran una mayor acumulación del transcrito en los embriones en estadío globular, mientras que en los estados mas avanzados de desarrollo la expresión parece estar asociada al desarrollo de los cotiledones, no detectándose apenas expresión en los ejes embrionarios de los embriones cotiledonares