Estudio funcional de factores reguladores de la transcripción en Saccharomyces cerevisiae

Abstract

La transcripción de los RNAs es un proceso esencial, que en eucariotas es llevado a cabo por las RNA polimerasas (RNAP I, II y III). Todas las RNAPs son complejos multiproteicos, formados por numerosas subunidades, y se encuentran evolutivamente muy conservadas. La RNAPII es la encargada de transcribir principalmente los genes que codifican proteínas, es decir los ARNm, y algunos ARN pequeños no codificantes. Está constituida por 12 subunidades (Rpb1 a Rpb12), y en Saccharomyces cerevisiae dos de las subunidades, Rpb4 y Rpb7, forman un heterodímero que se puede disociar del resto del complejo formado por las otras 10 subunidades. En los últimos años se han realizado numerosos estudios para descifrar el papel de Rpb4, no sólo en la transcripción, sino también en otros procesos celulares. Estudios de espectrometría de masas han mostrado que Rpb4 sufre modificaciones post-traduccionales que podrían regular su función. Entre estas modificaciones, se ha encontrado que existe una serie de serinas (S) y treoninas (T) fosforiladas en su secuencia peptítida. El principal objetivo de este TFM ha sido investigar cómo la mutación de estos residuos, sustituyéndolos por un aminoácido no fosforilable (alanina) o por uno que mimetizan la fosforilación (aspártico) afecta a algunas de las funciones descritas para Rpb4. Así se ha estudiado cómo estas mutaciones afectan a la modulación de la fosforilación de la subunidad mayor Rbp1, clave en la regulación de la expresión génica. Además, se ha investigado la importancia de los residuos S y T en la asociación de la RNAPII a los genes durante la transcripción. En conjunto, los resultados sugieren que la fosforilación/defosforilación de Rpb4 podría tener un papel en la regulación de la transcripción.