Estudio del efecto del antioxidante cinnamtannina B-1 sobre los espermatozoides epididimarios descongelados de ciervo

Abstract

El objetivo principal de este trabajo es el de evaluar el efecto del antioxidante natural cinnamtannina B-1 en muestras espermáticas de ciervo descongeladas, mediante un experimento de dosis/respuesta. El experimento se realizó con un pool de espermatozoides epididimarios descongelados de ciervo; en cada pool se combinaron dosis de 6 machos, y se replicaron al menos 6 veces. Inicialmente, las muestras espermáticas se descongelaron y evaluaron. Posteriormente, las muestras se diluyeron hasta una concentración final de 30 x 106 espermatozoides/mL en un medio de BGM (bovine gamete medium). Una vez diluidas las muestras, se alicuotaron y se les añadió concentraciones crecientes de cinnamtannina B-1 (0, 0,1, 1, 10 y 100 µM, respectivamente). Además, estas muestras se dividieron a su vez en dos, para poder someter a una de las alícuotas a estrés oxidativo (FeSO4 y ascorbato de sodio). Las muestras se evaluaron tras 0, 2 y 4h de incubación (37ºC). Se evaluó la motilidad (CASA); también, la viabilidad y apoptosis (YOPRO-1/IP), el estado mitocondrial (Mitotracker deep red), la peroxidación lipídica (C11-BODIPY 581/591) y la producción de radicales libres (CM-H2DCFDA), todo ello mediante citometría de flujo. Además, también se evaluó la integridad del ADN mediante SCSA® (Sperm Chromatin Stabillity Assay). Nuestros resultados muestran que la cinnamtannina B-1, en una situación de estrés oxidativo exógeno, con el paso del tiempo, a pesar de producir una leve disminución en la viabilidad, es capaz de mejorar la movilidad, así como los parámetros cinemáticos de los espermatozoides vivos, haciéndolos más rápidos y progresivos. Además, inhibe que se produzca la reacción acrosómica, aumentando el porcentaje de espermatozoides con acrosoma intacto. Finalmente, la cinnamtannina B-1 (100 µM), tras 4h de incubación, es capaz de disminuir la producción de radicales libres como consecuencia de un estrés oxidativo exógeno, así como de evitar el daño producido por dicho estrés a nivel de peroxidación lipídica. No hemos observado efecto de este antioxidante en el ADN espermático. Dicho antioxidante podría ser candidato para la mejora de los medios de manipulación de los espermatozoides, tanto a la precongelación como a la descongelación.