Producción de FSHß recombinante de lubina (Dicentrarchus labrax), obtención de anticuerpos y análisis de perfiles hipofisarios

Abstract

El presente trabajo describe la producción y purificación de la subunidad recombinante FSHß de lubina, la obtención de anticuerpos y la puesta a punto de un inmunoensayo para determinar niveles de FSH en hipófisis. La FSHß recombinante se obtuvo mediante un sistema de expresión baculovirus en la línea celular Sf9. Tras la purificación de FSHß recombinante e inmunización de conejos, se produjeron anticuerpos policlonales antiFSHß. Estos mostraron un reconocimiento escaso de la forma nativa de la FSH, por lo que se desarrolló un inmuno-dot-blot, que tras desnaturalización e inmovilización de las proteínas en membranas de PVDF permitió cuantificar FSH de diferentes orígenes. La sensibilidad del ensayo fue de 100 ng/ml y los coeficientes intra- e inter-ensayo de 9,8 % y 11,5 %, respectivamente. Mediante este ensayo se determinaron los perfiles anuales de FSH en hipófisis de hembras adultas de lubina. Estos mostraron un aumento de FSH durante las fases de postvitelogénesis y maduración en correlación con los perfiles hipofisários de LH, la expresión de receptor de FSH en gónada, los niveles de estradiol en plasma y el índice gonadosomático (GSI). Los antiFSHß nos permiten disponer de una nueva herramienta para identificar y cuantificar FSH.