Muestreo para recuentos de flagelados heterotróficos por citometría de flujo

Abstract

La citometría de flujo es una técnica inestimable para cuantificar la abundancia de distintos grupos microbianos (bacterias, cianobacterias, protistas fototróficos) y se utiliza ampliamente en oceanografía. Sin em- bargo, todavía no se aplica de forma rutinaria para cuantificar los protistas (nanoflagelados) heterotróficos (HNF). Para este fin existen dos protocolos descritos. El primero está basado en una tinción vital con Lysotracker que tiñe las vacuolas digestivas (de pH ácido) de los protistas heterotróficos antes de procesar la muestra en el citómetro (Rose et ál. 2004). El segundo protocolo está basado en la tinción del DNA de los flagelados heterotróficos (con SYBRGreen I) y su separación en los citogramas por su contenido de DNA superior al de las bacterias (Zubkov et ál. 2007, Christaki et ál. 2011) y la ausencia de autofluorescencia de la clorofila. El protocolo de Rose et ál. (2004) debe realizarse con muestras vivas, mientras que el de Zubkov et ál. (2007) puede realizarse en muestras fijadas, y los dos requieren tiempos de procesado >10 min. En el segundo caso el citómetro debe poder modificarse para las mediciones y no todos los modelos lo permiten. Estos condicionantes hacen muy difícil que puedan medirse los flagelados por citometría en una campaña en la cual se usan los citómetros para otras rutinas. Nosotros utilizaremos el segundo protocolo, ya que se puede aplicar en muestras fijadas, y también es más robusto (datos propios sin publicar). Además compararemos los valores obtenidos por citometría de flujo con los recuentos por epifluorescencia (véase el método correspondiente). [...]