Caracterización de la adaptación al ambiente intestinal de una cepa de L. delbrueckii subsp. lactis aislada de alimentos

Abstract

Lactobacillus delbrueckii es una especie intensamente empleada en la industria láctea para elaborar leches fermentadas y quesos duros. Esta especie no intestinal tiene limitada capacidad de sortear las barreras biológicas (acidez gástrica, bilis). En un trabajo previo se logró adaptar a L. delbrueckii subsp. lactis 200, una cepa autoagregante aislada en nuestro laboratorio de un fermento natural de suero de quesería, a desarrollar en presencia de bilis, mediante sucesivas exposiciones hasta 0,5% de sales biliares. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la adaptación al ambiente intestinal de esta cepa y su derivado resistente a bilis (200b+). Se estudió: 1) la supervivencia al tránsito intestinal in vitro (fluido intestinal simulado) y ex vivo (fluido intestinal de ratón esterilizado por filtración); 2) la capacidad de crecimiento en presencia de ácidos biliares; 3) el % de hidrofobicidad (partición en hexadecano); 4) la capacidad de autoagregación; 5) la capacidad de adhesión a la línea celular HT-29-MTX y 6) la interacción de las cepas con el intestino delgado en ratones BALB/c sacrificados luego de 10 y 30 min de haber recibido 108 UFC de bacterias marcadas (con isotiocianato de fluoresceína). No se detectaron diferencias en la resistencia al tránsito intestinal in vitro pero sí en el ensayo ex vivo, donde el derivado resistente a bilis mostró mayor sobrevida en fluido intestinal de ratón. Además, el derivado resistente a bilis presentó mayor capacidad de crecer en presencia de ácidos glicocólico, taurodeoxicólico y tauroquenodeoxicólico. La cepa original presentó alta hidrofobicidad (70 ± 0,9 %), la cual disminuyó significativamente (20 ± 0,6%), así como su capacidad de autoagregación, en presencia de 0,5% (p/v) de bilis bovina. La capacidad de adhesión a células HT-29-MTX fue muy alta para ambas cepas, aunque mayor para el original, ydisminuyó significativamente en presencia de sales biliares. En relación al estudio de interacción de las bacterias fluorescentes con el intestino, se observó, para la cepa original, la presencia de autoagregados celulares tanto en el lumen intestinal como adheridos a las vellosidades intestinales, mientras que para el derivado resistente a bilis, se observaron puntos fluorescentes internalizados en la lámina propia y en la zona basal de las vellosidades. El proceso de adaptación a bilis confirió mayor capacidad al derivado, de sobrevivir en fluido intestinal, mediante el aumento de la capacidad de crecer en presencia de ciertos ácidos biliares. Sin embargo, implicó una pérdida significativa de hidrofobicidad y capacidad de interacción con el intestino (menor permanencia de células en el lumen o adheridas al epitelio), lo que podría modificar la respuesta inmune intestinal.