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Title

Desarrollo de herramientas moleculares fluorescentes que permitan realizar estudios a nivel de células individuales en Staphylococcus aureus

AuthorsCaballero, Primitivo ; Villanueva, Maite ; Valle Turrillas, Jaione ; Solano Goñi, Cristina ; Lasa, Íñigo ; Toledo-Arana, Alejandro
Issue DateNov-2012
CitationIX Reunión del Grupo de Microbiología Molecular (2012)
AbstractEl reciente descubrimiento, por parte del nuestro grupo, de la existencia de un proceso generalizado de transcripción solapante en el genoma de Staphylococcus aureus, plantea la interesante pregunta de si ambos transcritos solapantes son producidos por una misma bacteria o por bacterias distintas en la población. Para poder responder a esta pregunta es necesario desarrollar herramientas que permitan analizar la expresión génica en células individuales mediante el uso de marcadores fluorescentes. Así, el objetivo principal de este trabajo consistió en desarrollar plásmidos que permitiesen expresar diferentes proteínas fluorescentes (GFP, YFP, CFP y mCherry) y que pudisesn ser integradas en el genoma bacteriano. La expresión cromosómica de dichos fluorocromos fue más débil que desde plásmido, pero suficiente para ser detectada y permitir la distinción de dos cepas marcadas con fluorocromos diferentes en una mezcla de bacterias. Como prueba de concepto, se utilizaron las herramientas construidas para estudiar la regulación de la expresión del RNA antisentido codificado en la cadena contraria al gen LexA. LexA es el principal regulador de la respuesta SOS bacteriana. Los resultados confirmaron que la expresión de dicho antisentido es dependiente del factor sigma B y que se incrementa a lo largo de la curva de crecimiento. Además, se demostró que si este RNA antisentido se expresa en cantidades suficientes sería capaz de inhibir la expresión de LexA. En conclusión, este estudio demuestra la integración de dos de las principales vías de regulación bacteriana, como son la respuesta a estrés y a daño celular, a través de una regulación post-transcripcional mediada por un RNA antisentido.
DescriptionTrabajo presentado en la IX Reunión del Grupo de Microbiología Molecular, celebrada en Palma de Mallorca del 14 al 16 de noviembre de 2012.
URIhttp://hdl.handle.net/10261/72900
Appears in Collections:(IDAB) Comunicaciones congresos
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