Procedimiento para la purificación de dos isoenzimas lipasa de Candida rugosa

Abstract

Procedimiento para la purificación de dos isoenzimas lipasa de Candida rugosa. Procedimiento para la purificación de dos lipasas extracelulares presentes en lipasa bruta comercial de la levadura Candida rugosa. El método consta de un sólo paso de cromatografía hidrofóbica en matriz de agarosa. Condiciones de elución muy diferentes permiten la completa separación y purificación de dos enzimas con actividad lipásica (lipasas A y B) presentes en el extracto comercial de partida. Para ello se utiliza un tampón concentrado de pH 6 a 8, con el que se eluyen de la columna gran parte de los contaminantes presentes en el extracto; luego con la misma solución tampón más diluida se arrastra la lipasa B. Posteriormente, con un di o polialcohol disuelto en el tampón diluido se eluye la lipasa A, de cuya solución, mediante concentración por ultrafiltración y cromatografía de exclusión molecular con dextrano, se elimina el alcohol. Se aplica industrialmente en la purificación de enzimas.