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Título

Evaluación de métodos basados en la PCR para la detección del fítoplasma asociado a la enfermedad de la "Flavescencia dorada" en vid.

Otros títulosEvaluation of methods based on PCR for the detection of the phytoplasma causing "flavescènce dorée" desease in gravepines.
AutorMartín, María P. ; Torres, Ester
Palabras claveExtracción DNA
Amplificación 16 rDNA
Stolbur
identificación fitoplasmas
Fecha de publicación2001
EditorEspaña. Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación
CitaciónBoletín de Sanidad Vegetal: Plagas 27: 217-224 (2001)
Resumen[EN]Four DNA extraction methods and two PCR protocols for the detection of the "flavèscence dorée" phytoplasma in grapevines were investigated. Periwinkle leaves inoculated with "Stolbur", another phytoplasma frequent in grapevines, were included in this study to check how the differences between the leaf tissues affect the extraction and the detection of the phytoplasma. In both amplification protocols the primers fU5/rU3 were used to amplify a part of the 16S rDNA. No products were visualised regardless of the extraction protocol from any of the symptomatic leaves from the "flavescence dorée" infected grapevine using the standard PCR protocol. However, three of the four extraction methods successfully amplified phytoplasma DNA from the symptomatic grapevine leaves to be detected using Ready-To-Go PCR Beads (Pharmacia-Biotech). The combination of E.Z.N.A, a commercial kit designed to extract DNA from plants, and direct amplification with the Ready-To-Go PCR Beads was the fastest and most reliable procedure (from the eight tested) for the detection of phytoplasma from grapevines. This procedure does not require the use of nested PCR-All extraction methods combined with any of the amplification protocols allowed detection of phytoplasma in all the periwinkle samples.
[ES]Se han investigado cuatro métodos de extracción y dos protocolos de amplificación por PCR para la detección del fítoplasma flavescencia dorada en viñas. Para comprobar si las diferencias de tejido pueden afectar a la extracción y detección de fitoplasmas, se han incluido en el estudio hojas de vinca inoculada con fitoplasmas del grupo stolbur, fítoplasma asociado con frecuencia a vid. Para las reacciones de amplificación se han utilizado los iniciadores f(J5/rU3 que permiten obtener copias de una región de unas 900 bpdel 16SrDNA. A partir de los aislamientos de DNA con los cuatros métodos de extracción de hojas de viñas con síntomas de flavescencia dorada, y tras el protocolo de amplificación estándar, no se visualizó ningún amplímero. Sin embargo, con tres de los cuatro métodos de extracción y mediante PCR-Beads, se visualizaron los amplímeros del fítoplasma. La combinación de E.Z.N.A., un kit commercial diseñado para extraer DNA de plantas, y la amplificación directa con Ready-To-Go PCR Beads resultó ser el procedimiento mejor y más rápido (de los ocho testados) para la detección de fitoplasmas en viña. Todos los métodos de extracción combinados con cualquier protocolo de amplificación consiguieron detectar fitoplasmas en todas las muestras de vinca.
Versión del editorhttp://www.marm.es/ministerio/pags/biblioteca/plagas/BSVP-27-02-217-224.pdf
URIhttp://hdl.handle.net/10261/45690
ISSN0213-6910
Aparece en las colecciones: (RJB) Artículos
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