Isolation and characterization of promoters from the Lactobacillus casei temperate bacteriophage A2

Abstract

Random Sau3AI DNA fragments from the temperate Lactobacillus bacteriophage A2 were cloned into the promoter-probe plasmid pGKV210. Seven DNA fragments with promoter activity were selected, after transformation of Escherichia coli and Lactococcus lactis, subsp. lactis, through the chloramphenicol resistance they conferred to the corresponding clones. The seven promoters were functional in Lactobacillus casei. Their strength was analysed by measuring the levels of chloramphenicol resistance and chloramphenicol acetyltransferase activity induced in each host. The nucleotide sequences of these fragments were determined and primer extension analysis was used to locate the initiation site of transcription from each promoter in E. coli. The promoters contained −10 and −35 regions similar to the consensus sequences of E. coli and Lactobacillus promoters

Des fragments d'ADN Sau3AI pris au hasard provenant du bactériophage tempéré A2 de Lactobacillus ont été clonés dans le plasmide-sonde de promoteurs pGKV210. Après transformation d'Escherichia coli et de Lactococcus lactis subsp. lactis, sept fragments d'ADN ayant une activité de promoteur ont été sélectionnés d'après la résistance au chloramphénicol conférée aux clones correspondants. Les sept promoteurs étaient fonctionnels chez Lactobacillus casei. La force de ces promoteurs a été évaluée en mesurant chez chacun des hôtes les niveaux de résistance au chloramphénicol et d'activité de la chloramphénicol acétyltransférase. Les séquences nucléotidiques de ces fragments ont été déterminées et l'analyse de l'allongement de l'amorce a servi à localiser le site d'initiation de la transcription de chacun des promoteurs chez E. coli. Les promoteurs contenaient des régions −10 et −35 semblables aux séquences consensus des promoteurs d'E. coli et de Lactobacillus