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Título : Proteómica bottom-up y top-down de organismos poco secuenciados. Secuenciación de novo de péptidos biomarcadores para la identificación de especies de la familia Merlucciidae
Autor : Carrera, Mónica
Director: Gallardo, José Manuel ; Piñeiro, Carmen ; Cañas, Benito
Palabras clave : Proteómica
Secuenciación
Identificación de especies
Biomarcadores
Fecha de publicación : 14-may-2008
Editor: Universidad de Vigo
Resumen: La proteómica puede ofrecer nuevas metodologías capaces de reconocer y caracterizar de forma sensible y rápida, marcadores moleculares proteicos útiles para la identificación de la amplia variedad de especies pertenecientes a la familia Merlucciidae, en una gran variedad de productos alimenticios. Sobre esta base y para la consecución del propósito que concierne al título de esta tesis, se seguirá de forma consecutiva y complementaria ambas estrategias proteómicas, tanto Bottom-Up como Top-Down, para la identificación y secuenciación de novo de una serie de péptidos biomarcadores útiles para la identificación de las distintas especies de la familia Merlucciidae, en cualquier producto alimenticio. Asimismo, se propondrá el desarrollo y diseño de nuevos procedimientos de autentificación basados en el análisis de péptidos y proteínas por espectrometría de masas, los cuales supondrán una mejora en términos de especificidad, sensibilidad, sencillez y rapidez frente a las metodologías disponibles hasta la fecha.
Para el desarrollo de esta tesis se han planteado los siguientes objetivos:
Identificar las proteínas cuyas movilidades electroforéticas (Mr y/o pI), obtenidas por electroforesis monodimensional y bidimensional, sean diferentes para las distintas especies de la familia Merlucciidae objeto de esta tesis.
Identificar y caracterizar mediante espectrometría de masas MALDI-TOF las variaciones en los mapas peptídicos de los digeridos trípticos de las proteínas diferenciales anteriormente identificadas, con la finalidad de determinar aquellos picos específicos que permitan la diferenciación de las distintas especies de la familia Merlucciidae.
Caracterizar las proteínas diferenciales mediante distintos procedimientos de secuenciación de novo, utilizando espectrometría de masas en tándem en un equipo ESI-IT. La determinación de la secuencia de los péptidos específicos, permitirá la consideración de los mismos como péptidos biomarcadores para la identificación inequívoca de las distintas especies de la familia Merlucciidae.
Desarrollar un nuevo procedimiento de autentificación para la identificación rápida de las principales especies comerciales de la familia Merlucciidae, a partir de la monitorización mediante espectrometría de masas, de los distintos péptidos específicos caracterizados en el objetivo anterior. Validar el procedimiento de identificación mediante su aplicación a distintos productos comerciales.
Caracterizar las distintas proteínas diferenciales sin mediar ningún proceso de digestión proteica. Con este objeto, se seguirá una estrategia Top-Down, utilizando un espectrómetro de masas de alta resolución, FTICR.
Descripción : 443 páginas.-- Tesis doctoral del Departamento de Bioquímica, Genética e Inmunología de la Universidad de Vigo y del Departamento de Tecnología de los Alimentos del Instituto de Investigaciones Marinas de Vigo (IIM-CSIC).-- Fecha de lectura: 11-03-2008.
Puede solicitar copia de la tesis a su autora en: mcarrera@iim.csic.es
URI : http://hdl.handle.net/10261/4245
Aparece en las colecciones: (IIM) Tesis
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