Silenciamiento génico mediado por shRNAs en células del epitelio seminífero de ratón

Abstract

El análisis de los datos presentados en este trabajo, junto con la revisión de las publicaciones científicas referentes al silenciamiento génico por RNAi en epitelio seminífero, nos ha permitido enunciar las siguientes conclusiones:1. La metodología de transfección in vivo en epitelio seminífero de ratones adultos, mediada por electroporación de onda cuadrada, únicamente permite la transfección de células de Sertoli, en las diversas condiciones establecidas para no dañar irreversiblemente el epitelio. 2. Se ha demostrado que es posible silenciar genes endógenos mediante la introducción de shRNAs en células de Sertoli tanto in vivo como in vitro. 3. Los genes Drosha, Dicer, Ago1, Ago2, Ago3 y Ago4 que codifican proteínas participantes en los mecanismos moleculares conducentes a silenciamiento génico por RNAi, presentan diferentes niveles de expresión en los tejidos analizados, siendo la expresión de Ago3 y Ago4 especialmente abundante en testículo. 4. Existe correlación positiva entre la expresión de los genes Ago2, Ago3, Drosha y Dicer. No se encuentra correlación de la expresión de Ago1 y Ago4 con la del resto de genes analizados, siendo su expresión especialmente alta en bazo y testículo, respectivamente, sugiriéndonos un papel especializado en estos tejidos. 5. La expresión de los 6 genes analizados está regulada durante el desarrollo del epitelio seminífero. Su expresión es dependiente del tipo celular, de manera que, Dicer y Ago2 se expresan preferentemente en células somáticas, mientras que Drosha, Ago3 y Ago4 lo hacen en células de la línea germinal.