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Covalent complexes of lipases with proteins, dna probes, cofactors or other biomolecules

Other TitlesComplejos covalentes de lipasas con proteínas, sondas de adn, cofactores u otras biomoléculas
AuthorsGuisán, José Manuel CSIC ORCID ; Bolívar Bolívar, Juan Manuel; Mateo González, César; Batalla Bosquet, Pilar CSIC; López Gallego, Fernando; Maciello, Marzia; Palomo, José Miguel; Fernández-Lorente, Gloria CSIC ORCID CVN
Issue Date9-Dec-2010
CitationWO2010139837 A1
Abstract[EN] The invention relates to complexes that incIude lipases covalently bonded, by means of regions not involved in the active centre thereof, to biomolecules of interest (proteins such as enzymes, antibodies or proteins A or G, cofactors or DNA probes). The complexes can be immobilised via the intact active centre ofthe lipases on all types ofhydrophobic media, without requiring any modifications or activations thereof. The bonding of the lipase to the hydrophobic media is reversible, allowing the reversible immobilisation of the complexes. The invention provides two methods, chemical and biological, for preparing said complexes, as well as a method for immobilising said complexes. Said immobilised complexes can be used in industry, in laboratories or in diagnostics, given the potential use thereof as biocatalysts or as biosensors. The chemical method incIudes adsorbing the lipase to a porous hydrophobic medium, combining the lipase thus adsorbed with the biomolecule, and desorbing said complex from the medium using detergents. The biological method incIudes inserting the gene of the biomolecule in a plasmid containing the gene of the lipase, in a microorganism, in order for the latter to express the lipase fused with the biomolecuIe. The reversible immobilisation ofthe complexes generated using either ofthe two methods can be carried out on nonporous hydrophobic media.
[ES] Complejos que comprenden lipasas unidas covalentemente, a través de regiones no involucradas en su centro activo, a biomoléculas de interés (proteinas, como enzimas, anticuerpos o proteinas A o G, cofactores o sondas de ADN). Los complejos se pueden inmovilizar a través del centro activo intacto de las lipasas sobre todo tipo de soportes hidrofóbicos sin necesidad de realizar modificaciones o activaciones en los mismos. La unión de la lipasa a los soportes hidrofóbicos es reversible, lo que permite la inmovilización reversible de los complejos. La invención proporciona dos métodos, quimico y biológico, de preparación de estos complejos y un método de inmovilización de los mismos. Estos complejos inmovilizados pueden tener aplicaciones en la industria, en el laboratorio o en diagnóstico, debido a su uso potencial como biocatalizadores o como biosensores. El método quimico comprende la adsorción de la lipasa a un soporte hidrofóbico poroso, la conjugación de la lipasa asi adsorbida con la biomolécula y desorber este complejo del soporte mediante el uso de detergentes. El método biológico comprende la inserción del gen de la biomolécula en un plásmido conteniendo el gen de la lipasa, en un microorganismo, para que éste exprese la lipasa fusionada a la biomolécula. La inmovilización reversible de los complejos creados a partir de cualquiera de los dos métodos se puede realizar en soportes hidrofóbicos no porosos.
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