Evolución a tiempo real con Pseudomonas stutzeri

Abstract

En 1988 el profesor Richard Lensky de la universidad de Michigan inoculó 12 Erlenmeyers con Escherichia coli iniciando así uno de los mayores experimentos evolutivos en tiempo real. Basándonos en este experimento diseñamos un estudio evolutivo utilizando Pseudomonas stutzeri AN10, cepa poseedora de una capacidad de mutación cercana a la hipermutación (4 x 10-7. Martín-Cardona C, 2009. Tesis doctoral. UIB). A diferencia con el modelo de Lensky el estudio con la cepa AN10 supone la introducción de fuerzas selectivas: falta de nutrientes (serie lenta) y máxima velocidad de migración en placa (serie rápida). Para ello, los experimentos se realizaron en placas de LB y en cada pase (finalizado al aproximarse el margen colonial a los bordes de la placa) se tomaron muestras del borde colonial (para la serie rápida) o del centro de la misma (serie lenta). Tras una suspensión del material en Ringer se inocularon 2.5 μL en el centro de una nueva placa. Fruto de este experimento en el que se ha mantenido la selección durante más de un año se han podido observar cambios estadísticamente significativos entre las áreas colonizadas por la serie rápida y lenta, evaluados tras ocho días de crecimiento, así como en el tiempo de generación y el tamaño celular de los derivados seleccionados. Así mismo, son también relevantes los cambios en la ultraestructura de la colonia y la aparición de nuevos fenotipos. Finalmente, fruto de la secuenciación del punto medio del experimento y a la espera de la obtención de los datos para la serie final, se ha determinado la estabilización de 43 SNPs, afectando algunos de los cuales a genes relacionados con los cambios fisiológicos observados tales cómo transportadores de membrana, porinas y componentes del Pilus de tipo IV.