Ensayo en cricetos sobre la capacidad protectora de una proteína antigénica de Dicrocoelium dendriticum

Abstract

[ES] El control de la dicroceliosis se realiza habitualmente mediante la aplicación de tratamientos antihelmínticos al ganado, aunque una estrategia alternativa podría ser la utilización de vacunas. Por ello, el objetivo de este estudio fue valorar la capacidad inmunoprotectora de la proteína de 130 kDa de Dicrocoelium dendriticum en cricetos. Se analizaron, por SDS-PAGE, fracciones de antígeno excretor-secretor del parásito eluidas por cromatografía de intercambio iónico y enriquecidas con la proteína. La banda correspondiente fue escindida de los geles, triturada, emulsionada con adyuvante de Freund e inoculada a los cricetos subcutáneamente (4 mg proteína/dosis) en 2 ocasiones con intervalo de 3 semanas. Se utilizaron 60 animales divididos en 4 grupos de 15 individuos cada uno: Gi (testigo); G2 (infectado); G3 (inmunizado con adyuvante Freund e infectado); G4 (inmunizado con proteína de 130 kDa + adyuvante e infectado). Cuatro semanas después de la última inmunización, se realizó la infección con 40 metacercarias/ criceto. Se efectuaron las siguientes determinaciones: parasitológicas [número de huevos/gramo (hpg) número de parásitos recuperados]; parámetros bioquímicos (proteínas totales, albúmina, bilirrubina total) y enzimas hepáticas (AST, ALT); niveles de lgG totales. En la semana 16 postinfección (p.i.) se observó una reducción del número de hpg en el G3 y G4, con el mayor % de reducción en este último (25,2%). No se detectaron diferencias en la media de vermes recuperados entre grupos, aunque fue ligeramente menor en el G4 (12,2±2,0;‘x±EE) que en el G2 (15,4±2,9). En el G4 la protección global fue de 20,8% y se observó una reducción en los niveles de AST y ALT a las 8 semanas p.i. Los niveles de lgG totales fueron similares en los 3 grupos infectados. Ante los resultados obtenidos consideramos necesario realizar nuevos ensayos para optimizar: dosis de antígeno, ruta de inoculación, nf de inmunizaciones y tiempo entre éstas y la infección.

[EN] Dicrocoeliosis control is usually achieved through anthelmintic treatments on livestock, although an alternative strategy could be vaccination. Therefore, the purpose of this project was to evaluate the immunoprotective capacity of 130 kDa Dicrocoelium dendriticum protein on hamsters. We ran an SDS-PAGE to analyze fractions of excretory-secretory parasite antigen eluted by ion-exchange chromatography and enriched with the protein. The correspondíng band was excised from gels, crushed, emulsified with Freund’s adjuvant and twice subcutaneously inoculated to hamsters (4 mg protein/dose) with a 3-week interval. Sixty hamsters distributed in 4 groups of 15 animals each were used: G1 (control); G2 (infected); G3 (Freund’s adjuvant immunized and infected); G4 (130 kDa protein immunized + adjuvant and infected). Four weeks after the last immunization, the animals were infected with 40 metacercariae/hamster. The following measurements were carried out: parasitological [number of eggs per gram (hpg), number of worms recovered]; biochemical parameters (total proteins, albumin, total bilirubin) and hepatic marker enzymes (AST, ALT); total lgG levels. On week 16 postinfection (p.i.) a reduction on hpg number on G3 and G4 was observed, with a higher reduction percentage in the latter (25.2%). No differences were detected in the mean of recovered worms between groups, although it was slightly less in G4 (12.2±2.0;’x ± EE) than in G2 (15.4±2.9). In G4 the global protection was 20.8% and a reduction in AST and ALT levels was observed at 8 weeks pi. The total lgG levels were similar in the 3 infected groups. Given the results obtained, we deem it necessary to perform new tests in order to optimize the following: antigen dose, inoculation route, number of immunizations and time between these and infection.