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Title

Estudio de las funciones replicativas de Rad51 durante la tolerancia a daños replicativos

AuthorsVicioso Mantis, Marta
AdvisorPrado, Félix ; Huertas Sánchez, Pablo
KeywordsRAD51
HR (Homologous Recombination)
TS (Template Switch)
DDT (DNA Damage Tolerance)
Daños replicativos
Issue Date2016
PublisherCSIC-JA-UPO-USE - Centro Andaluz de Biología Molecular y Medicina Regenerativa (CABIMER)
AbstractLa proteína de recombinación homóloga Rad51 desempeña un papel clave en la respuesta de tolerancia al daño en el ADN. Esta viaja con la horquilla de replicación tanto en ausencia como en presencia de daño, de tal manera que cuando lo hay promueve la replicación ayudando a saltar lesiones bloqueantes, proceso que deja regiones de ADN de cadena simple tras la horquilla que serán luego reparadas en G2/M. Esto sugiere que Rad51 tiene funciones replicativas y reparacionales diferenciadas y reguladas espaciotemporalmente, aunque acopladas mecanísticamente. Con el objetivo de definir estas actividades adecuadamente, en el laboratorio del Dr. Prado se han buscado mutantes de RAD51 de separación de funciones, consiguiéndose aislar 7 mutantes afectados principalmente en la función replicativa. El objetivo de este trabajo ha sido caracterizarlos genética y molecularmente. Para ello, en primer lugar hemos clonado los alelos de rad51 mutantes y hemos analizado su sensibilidad a los agentes genotóxicos MMS, radiación γ, zeocina e hidroxiurea, obteniendo varios grados de sensibilidad/resistencia a los mismos; posteriormente, hemos estudiado su ciclo celular mediante análisis de la concentración de ADN por FACS, si bien este ensayo no ha sido concluyente; finalmente, hemos caracterizado las mutaciones del gen RAD51 de cada uno, y a raíz de los resultados obtenidos hemos planteado un ensayo de doble híbrido para estudiar la interacción de Rad51 con Rad54, la cual podría verse interrumpida por algunas de las mutaciones encontradas. En cualquier caso, se debe profundizar la caracterización aquí iniciada ya que sigue sin conocerse la causa de los problemas replicativos de estos mutantes.
DescriptionTrabajo Fin de Grado Experimental: Grado en Biomedicina Básica y Experimental.
URIhttp://hdl.handle.net/10261/166138
Appears in Collections:(CABIMER) Tesis
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