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Title

Estudio de la efectividad de enzimas sobre biofilm mixtos de Listeria monocytogenes

AuthorsCarballo-Justo, Alba
AdvisorLópez Cabo, Marta ; Rodríguez Herrera, Juan José ; Vázquez Vázquez, Manuel
Issue Date2015
Abstract[EN] Listeria monocytogenes is a foodborne pathogen which causes human listeriosis, a disease with high mortality rate in the risk group consists of pregnant women, immunocompromised and elderly people. Their persistence in processing plants as biofilms facilitates cross contamination and outbreaks of foodborne listeriosis. It is therefore necessary to develop new strategies for cleaning and disinfecting to ensure its elimination. Starting from the hypothesis that the disintegration of the matrix prior exopolysaccharides the application of disinfectants contribute to the disinfection efficiency was studied and compared the effectiveness of pronase, cellulase and DNase enzymes alone and applied in combination with benzalkonium chloride before a mixed biofilm of L. monocytogenes- E. coli, representative of sources of contamination of surfaces processing plants fisheries. Furthermore, the effects observed with E. coli obtained after replacing P. fluorescens strain as compared companion. To do this, quantitative studies based on determining the number of adherent cells in each case and qualitative studies based on analysis of images obtained by fluorescence microscopy were performed. The results demonstrated that L. monocytogenes is significantly more sensitive to the application of enzymes than E. coli and the DNase is found to be the most effective enzyme, followed by pronase and cellulase. In addition, the sequential application of pronase and DNase with benzalkonium chloride was more effective on the removal of L. monocytogenes, the combination being more effective disinfectant pronase. Finally, it was shown that the presence of E. coli or P. fluorescens strain as passenger associated with L. monocytogenes on mixed biofilm formed at 25°C on stainless steel coupons determines dimensional structure and its sensitivity to application of external treatments.
[ES] Listeria monocytogenes es un patógeno transmitido por alimentos que causa listeriosis humana, una enfermedad con alta tasa de mortalidad en el grupo de riesgo constituido por embarazadas, inmunodeprimidos y gente de avanzada edad. Su persistencia en plantas de procesado en forma de biofilms facilita la contaminación cruzada y la aparición de brotes de listeriosis de origen alimentario. Es necesario, pues, el desarrollo de nuevas estrategias de limpieza y desinfección para asegurar su eliminación. Partiendo de la hipótesis de que la desintegración de la matriz de exopolisacáridos previa a la aplicación de desinfectantes contribuiría a la eficacia de la desinfección, se estudió y comparó la efectividad de las enzimas pronasa, celulasa y DNasa solas y aplicadas en combinación con cloruro de benzalconio frente a un biofilm mixto de L. monocytogenes- E.coli, representativo de focos de contaminación de superficies de plantas de procesado de la industria pesquera. Además, se compararon los efectos observados con los obtenidos tras sustituir E. coli por P. fluorescens como cepa acompañante. Para ello, se realizaron estudios cuantitativos basados en la determinación del número de células adheridas en cada caso y estudios cualitativos basados en el análisis de imágenes obtenidas por microscopía de fluorescencia. Los resultados obtenidos demostraron que L. monocytogenes es significativamente más sensible a la aplicación de enzimas que E. coli y que la DNasa resulta ser la enzima más efectiva, seguida de pronasa y celulasa. Además, la aplicación secuencial de pronasa y DNasa con cloruro de benzalconio resultó más efectiva sobre la eliminación de L. monocytogenes, siendo más efectiva la combinación del desinfectante con pronasa. Por último, se demostró que la presencia de E. coli o P. fluorescens como cepa acompañante asociada con L. monocytogenes en biofilm mixto formado a 25°C en cupones de acero inoxidable determina su estructura bidimensional y su sensibilidad a la aplicación de tratamientos externos
[GA] Listeria monocytogenes é un patóxeno de orixe alimentaria que provoca listeriose humana, unha enfermidade con alta taxa de mortalidade no grupo de risco, o cal está composto por embarazadas, inmunocomprometidos e terceira idade. A súa persistencia no plantas de procesamento como biofilms facilita a contaminación cruzada e a aparición de brotes de listeriose de orixe alimentaria. Por iso, é necesario o desenvolvemento de novas estratexias para a limpeza e desinfección para garantir a súa eliminación. Partindo da hipótese de que a desintegración da matriz de exopolisacáridos previa á aplicación de desinfectantes contribúen a eficiencia da desinfección, estudouse e comparouse a eficacia das enzimas pronasa, celulasa e DNasa soas e aplicadas en combinación có cloruro de Benzalconio fronte a un biofilm mixto de L. monocytogenes- E .coli, representativo de focos de contaminación de superficies de plantas de procesado da industria pesqueira. Ademais, comparáronse os efectos observados cos obtidos tras a substitución de E. coli por P. fluorescens como cepa compañeira. Para iso, realizáronse estudos cuantitativos baseados na determinación do número de células adheridas en cada caso e estudos cualitativos baseados na análise de imaxes obtidas por microscopia de fluorescencia. Os resultados demostraron que L. monocytogenes é significativamente máis sensible á aplicación de enzimas que E. coli e que a DNasa resultou ser a enzima máis eficaz, seguida de pronasa e celulasa. Ademais, a aplicación secuencial de pronasa e DNasa con cloruro de Benzalconio foi máis eficaz na eliminación de L. monocytogenes, sendo a combinación máis eficaz do desinfectante con pronasa. Finalmente, se demostrou que a presenza de E. coli ou P. fluorescens como cepa pasaxeiro compañeira asociada con L. monocytogenes en biofilm mixto formado a 25°C en cupóns de aceiro inoxidable determina a súa estrutura bidimensional e a súa sensibilidade á aplicación de tratamentos externos
Description64 pages, 14 figures, 3 tables
URIhttp://hdl.handle.net/10261/162558
Appears in Collections:(IIM) Tesis
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