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Título

Análisis de las proteínas nucleolares NopA100 y NopA64 en relación con la proliferación celular en Allium cepa L.

AutorGonzález-Camacho, Fernando
DirectorMedina, F. Javier
Palabras claveNucleolo
Proteínas nucleolares
Meristemo de la raíz
Proliferación celular
Ciclo celular
Núcleos aislados
Fecha de publicación2004
EditorCSIC - Centro de Investigaciones Biológicas (CIB)
Universidad Autónoma de Madrid
Resumen[EN] In this worfc wc have studicd the phytico-chcmical fea t u r o of thc nuclcolar protctm NopAlOO and NopAM. which are majar protctns in thc soluble nuclear fraetton tn proliferating celK. although they al so display significan! levéis in thc most involuhlc fraclion (nuclear matrix). The lepéis of these proteins « e r e higher in thc 0 2 phasc (han in any other nhase of the cell cyc'le. Their nuclcolar diMnhutmn. studied by light and electrón microsopy. was uneven. mainly appcanng in thc fibnllar components of thc nucleolus. Western blot analysis with anu-NopAlOO antibody revealed a major band at thc Icvcl of 100 kDa and .IIMI ihe presence of a seríes of mmor and smallcr bands. which are thc rcsult of thc proteolytic maturation of NopAlOO. This fací has been cvidcnccd afler treatment with leupeptin. a general proteasc inhibitor: a rclationship between thc mercase in thc activity of nucleolus. the activity of NopAlOO. thc cell eyele progression, and the proteolytic maturation of the protein. has been postulated. Varíations of NopAlOO through thc cell eyele are accompamed by a structural reorganizatton of thc nucleolus. which is expressed as quantitative changes in thc rclati\c contríbution of thc difieren) nucleolar subcomponents to the uholc nuclcolar volumen Conscquenily, we have designcd a structural model of nucleolar organi/ation for cach onc of the intcrphasc períods of proliferating cclls KM tu res of NopAlOO show intcrcsiing analogics wiih thosc of mammalian nucieolin, on its p.in. \ o p A 6 4 appcars lo be a stabic fragment of thc NopAlOO. "Ruis, both protaiM should be ineluded in thc protein group known as "nucleolin-like" protcmv This fact, together with a dctailed analysis of thc amino acid vcquenecs of the rest of "nuclcolin-like" proteins in other organisms. confirms thc high evolutionary conservation of nucleolin and its homologous proteins. which is thc consequence of the highly relevan! functional roleplayed by this protein in thc life of the cell, taking a decisive part in thc regulation of ihe ribosome biogénesis and of thc cell eyele. as well as in the coordinaron of thc lwo processes. By using a combination of sequenttal. functionally significan! fractionation with bidimensional gel electrophoresis. Western blot. and AgNOR staming. we have defined a collection of spots related to cell proliferalion. such as B23, NopAlOO. and NopA64, and we have got the bidimensional pattern for both actively proliferating and non-prohferating cells. These tcchntqucs have shown thc importance of phosphorylation in thc modulation of the activity of some proteins. particularly of NopAlOO.
[ES] En este trabajo se han analizado las propiedades (luco-químicas de las proteínas núcleo lares NopA 100 y NopA64. que son mayontanas en la fracción soluble de los núcleos de células en proliferación, aunque también presentan nivele* significanvos en la fracción mil iruoluble (matriz nuclear). Las proteínas mostraron un incremento en la fase G2 del ciclo celular. Mediante inmunocitoquimica a nivel de microscopía óptica y electrónica, se observó una divinhucion desigual dentro del nucléolo, apareciendo principalmente en los componentes fibnlarcs I n análisis mediante Wet$tm blot con anticuerpo anti-NopA 100 mostró una banda principal a 1ÍX) kDa junto con una serie de proteínas relacionadas con ella, de menor tamaño Este resultado sugiere que la NopA 100 sufre un proceso fisiológico de maduración proteolitica. lo que fue confirmado mediante un tratamiento con un inhibidor de proteasas general, la Icupeptina. Se observó una relación entre el incremento de la actividad del nucléolo y la actividad de la NopA 100, el progreso en el ciclo celular y la maduración de la proteina. Hemos demostrado que las variaciones de la NopA 100 durante la progresión del ciclo celular van acompañadas de una reorganización estructural del nucléolo, que es expresada en cambios cuantitativo* de la contribución relativa de los diferentes subcomponentes nuclcolarcs al volumen total del nucléolo. Coasiguientemcnic. hemos diseñado un modelo estructural de la organización nucleolar para cada uno de los períodos de la m1crfa.se El conjunto de sus propiedades identifica a la NopA UKi como una proteina homologa a la nueleolina de mamíferos > a la NopA64 como un fragmento estable de la NopA 100 I sic hecho, junto con el análisis detallado de las secuencias de aminoácidos del resto de "proteínas semejantes a nueleolina" en otros organismos, confirma la alta conservación evolutiva que presenta, la cual es la consecuencia del papel funcional extraordinariamente relevante de esta proteína en la vida de la célula, interviniendo decisivamente en ta regulación del ciclo celular y de la biogénesis de los ribosomas y en la coordinación de ambos procesos. Mediante la combinación del fraccionamiento secuencial con la realización de gclcs tridimensionales. Western hlnt y tinción "AgNOR". hemos definido un conjunto de spots relacionados con la proliferación celular entre los que se encuentran la B23. NopA 100 y NopA64 y hemos obtenido el patrón bidimensional para los dos estados, proliferativo y no prolifcrativo. Estas técnicas han puesto de manifiesto la gran importancia que tiene la fosforilación de algunas de estas proteínas, en particular de la NopA 100. en la modulación de ^u actividad..
Descripción144 p.-55 fig.-4 tab.-1 esq.
URIhttp://hdl.handle.net/10261/161342
Aparece en las colecciones: (CIB) Tesis
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