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Title

Inducción química de estrés oxidativo en células: Efecto protector de péptidos derivados de proteínas animales

AuthorsMartín Alonso, Ángela
AdvisorHernández-Ledesma, Blanca CSIC ORCID; Amigo, Lourdes CSIC ORCID
Issue Date2015
PublisherCSIC-UAM - Instituto de Investigación en Ciencias de la Alimentación (CIAL)
AbstractEl estrés oxidativo se ha asociado a múltiples trastornos, como los cardiovasculares, neurodegenerativos e intestinales, la inflamación, la diabetes, el cáncer y el propio envejecimiento. Debido a los efectos secundarios demostrados para los antioxidantes artificiales, en los últimos años el interés se ha centrado en la búsqueda de compuestos de origen natural con capacidad antioxidante. Para evaluar la actividad antioxidante de péptidos alimentarios, se ha de demostrar su capacidad neutralizadora de radicales en ensayos químicos in vitro, para posteriormente evaluar su efecto protector en modelos celulares (ex vitro) y en última instancia sobre modelos animales y humanos (in vivo). En este trabajo se ha llevado a cabo la optimización de las condiciones de inducción de estrés oxidativo en dos líneas celulares, enterocitos humanos Caco-2 y macrófagos de ratón RAW264.7, empleando dos agentes químicos, el hidroperóxido de terc-butilo (t-BOOH) y el peróxido de hidrógeno (H2O2). La optimización se estableció mediante la medida del efecto de ambos compuestos sobre la viabilidad celular (ensayo MTT) y sobre la producción intracelular de especies reactivas de oxígeno (ROS) (ensayo DCFH-DA) en función del tipo de compuesto, su concentración y el tiempo de estimulación. Una vez optimizadas las condiciones, se seleccionó el t-BOOH para inducir estrés, a una concentración de 1 mM para las células Caco-2 y de 0,25 mM para los macrófagos RAW264.7 que resultaron ser más sensibles al efecto de este agente químico. Posteriormente, se evaluó el efecto protector de péptidos derivados de proteínas animales sobre el estrés oxidativo tanto en las células en estado basal, como en las células tratadas con t-BOOH. Para ello, se seleccionaron los péptidos YLGYLE, RYLGYLE e YFYPEL procedentes de la αs1-caseína, y el péptido YPWT, procedente de la β-hemoglobina, cuya actividad neutralizante de radicales peroxilo había sido previamente determinada mediante el método in vitro “de capacidad de absorción de radicales de oxígeno” (ORAC). Se evaluó su efecto sobre la viabilidad celular y sobre la producción intracelular de ROS. En los enterocitos humanos Caco-2, se observó que los cuatro péptidos resultaban inocuos para las células, sin afectar a la viabilidad celular. Además los cuatro péptidos ensayados ejercieron un efecto protector frente al estrés oxidativo inducido químicamente en células Caco-2, con diminuciones significativas de la producción intracelular de ROS, pero sin observarse un efecto dosis-dependiente. Sin embargo, en los macrófagos de ratón RAW264.7, los péptidos no mostraron un efecto de disminución de la producción intracelular de ROS, indicando la importancia del tipo celular en el efecto oxidante de los péptidos. En conclusión, los péptidos procedentes de proteínas animales evaluados en este estudio se presentan como agentes prometedores para preservar la integridad de la mucosa intestinal contra el estrés oxidativo, y por lo tanto, prevenir la aparición de desórdenes intestinales asociados a dicho estrés.
DescriptionResumen del Trabajo de Fin de Máster: Máster en Química Agrícola y Nuevos Alimentos presentado por Ángela Martín Alonso en la Universidad Autónoma de Madrid (UAM) y realizado en el Instituto de Investigación en Ciencias de la Alimentación (CIAL-CSIC).
URIhttp://hdl.handle.net/10261/152127
Appears in Collections:(CIAL) Tesis

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