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Title

La inhibición de la actividad Aurora quinasa B mediada por VHC regula la respuesta antiinflamatoria en las fases iniciales de la infección

AuthorsFrancisco-Recuero, Irene; Madejón, Antonio; Sheldon, Julie CSIC ORCID; Perales, Celia CSIC ORCID; Gil, Ana Isabel; Muntané, Jordi; Domingo, Esteban CSIC ORCID; García-Samaniego, Javier; Sánchez-Pacheco, Aurora
Issue DateSep-2014
CitationXXXVII Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular (2014)
Abstract[Introducción] Los cambios epigenéticos, entre los que se encuentran las modificaciones covalentes de histonas, son cruciales en la inducción de inestabilidad genética asociada a enfermedades en humanos, incluyendo el desarrollo de fibrosis hepática y carcinoma hepatocelular. Sin embargo, se desconoce el papel que este tipo de modificaciones pueda tener en la evolución de la enfermedad hepática producida por el virus de la hepatitis C (VHC).
[Objetivos] Estudiar las modificaciones covalentes de histonas inducidas por la infección por VHC y determinar los mecanismos moleculares implicados.
[Métodos] Para determinar el papel del VHC en la inducción de cambios epigenéticos se utilizó un sistema de infección in vitro de VHC (VHCcc) sobre la línea celular Huh7.5. Alternativamente la región codificante de la proteína del core viral (genotipos 1a, 1b y 2a) se clonó en un vector de expresión eucariota con el que se realizaron ensayos de transfección transitoria sobre la línea celular Huh7.5 y en cultivos primarios de hepatocitos humanos. Las modificaciones de histonas se analizaron por Western Blot, utilizando anticuerpos específicos. Para determinar las actividades enzimáticas implicadas se ensayó el efecto de inhibidores específicos como el ZM443979 y ensayos de siRNA. La expresión de genes implicados en el control de la actividad inflamatoria, como NF-κB y COX-2, se determinó por RT-PCR cuantitativa.
[Resultados] Hemos demostrado que el HCV a través de la proteína core inhibe la fosforilación del residuode Serina 10 de la histona H3 (H3Ser10ph), un marcador epigenético asociado a la regulación de la actividad transcripcional y la mitosis celular. Los ensayos con inhibidores de actividades enzimáticas implicadas en la fosforilación de histonas demostraron que el efecto sobre la H3Ser10 inducida por la proteína del core viral se inhibía en presencia de ZM443979, un inhibidor de la actividad Aurora quinasa B (AKB). Mediante ensayos de coinmunoprecipitación observamos una interacción directa entre la proteína del core viral y la AKB. La interacción con la proteína del core indujo una inhibición de la actividad quinasa de la AKB. Asociado a la inhibición de la actividad AKB se observó una inhibición de transcripción de NF-κB y COX-2, genes implicados en el control de la respuesta inflamatoria. La sobreexpresión de AKB revirtió este efecto y disminuyó la infectividad extracelular del virus, de manera opuesta la inhibición de la actividad de Aurora B aumentó la infectividad viral.
[Conclusiones] La proteína del core del VHC interacciona con AKB inhibiendo su actividad quinasa y disminuyendo los niveles de fosforilación de la H3Ser10ph así como la expresión de NF-κB y COX-2, dos genes implicados en la regulación de la respuesta inflamatoria. Este mecanismo podría ser una nueva estrategia del VHC para asegurar su infectividad y persistencia en la célula huésped.
DescriptionTrabajo presentado en el XXXVII Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular (SEBBM), celbrado en Granada del 9 al 12 de septiembre de 2014.
URIhttp://hdl.handle.net/10261/142218
Appears in Collections:(IBIS) Comunicaciones congresos
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