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Título

Genes implicados en la respuesta de lubina (Dicentrarchus labrax L.) frente a nodavirus

AutorPoisa Beiro, Laura
DirectorFigueras, Antonio ; Novoa, Beatriz
Palabras claveLubinas
Nodavirus
Fecha de publicación9-jun-2009
ResumenLa lubina europea (Dicentrarchus labrax L.; Moronidae; Perciformes) es una de las especies marinas de mayor relevancia económica, fundamentalmente en la acuicultura del Mediterráneo. Sin embargo, numerosos virus, bacterias, hongos, etc. afectan a esta especie causando varias enfermedades infecciosas. Entre ellas se encuentra la necrosis nerviosa viral (VNN), enfermedad que se caracteriza por el desarrollo de encefalopatías y retinopatías vacuolizantes que son detectadas mediante histología y están asociadas a nataciones erráticas que desembocan en mortalidades muy elevadas (alcanzando el 100% en multitud de ocasiones), fundamentalmente en estadíos larvarios y juveniles de las especies afectadas. En la presente tesis doctoral se propusieron tres objetivos principales, estudiar la expresión de citoquinas pro,inflamatorias y de la proteína antiviral Mx en lubina (especie susceptible al nodavirus) y en dorada (especie resistente), estudiar los efectos de la hiperoxia en la expresión de los genes anteriores y detectar nuevos genes involucrados en la respuesta inmune de la lubina frente a la VNN. Para cumplir este último objetivo se realizó una hibridación sustractiva (SSH) en riñón 4 horas después de una infección intramuscular con nodavirus en la que se obtuvieron varios genes involucrados en respuesta inmune (8.7%); entre estos genes nos centramos en el estudio de las lectinas, componentes del sistema inmune innato capaces de unir y posiblemente opsonizar microorganismos y que, por tanto, actúan como primera línea de defensa contra los patógenos. Como resultado de la SSH obtuvimos expressed sequence tags (ESTs) correspondientes a dos lectinas tipo C, una pentraxina y una galectina,1, se aplicó la técnica de RACE para obtener todo el ORF de estos genes permitiendo así su caracterización y comparación con los ya descritos en otras especies. Se sintetizó la proteína recombinante de la galectina,1 de lubina mediante el sistema de expresión en células procariotas y se purificó por columna de cromatografía gracias a su capacidad de unión a los β,galactósidos. Se determinó su actividad galectina mediante hemaglutinación y se realizaron ensayos funcionales entre los que destacó la medida del estallido respiratorio, observándose una disminución dosis,dependiente del mismo con la presencia de galectina,1 recombinante, y de expresión de citoquinas y de Mx en cerebro después de una infección experimental de nodavirus de forma simultánea a galectina,1 recombinante o de nodavirus sólo. Se demostró la capacidad anti,inflamatoria de la galectina,1 y su posible papel como inhibidor de la replicación del nodavirus.
Descripción226 páginas
URIhttp://hdl.handle.net/10261/13574
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