Alm1p se requiere para la correcta captura de los cromosomas en S. pombe

Abstract

Alm1 es una proteína de alto peso molecular que pertenece a la familia de las TPR. La proteínas tipo TPR son proteínas que forman parte del complejo del poro nuclear (NPC) en células eucariotas y cuya estructura terciaria está organizada en regiones tipo >coiled-coil” implicadas, normalmente, en interacción proteína-proteína. Se han descrito distintas funciones de los miembros de esta familia en diversos procesos tales como el mantenimiento del SPB (spindle pole body, o centrosoma), organización de cromatina, retención de mRNA mal procesados, etc. En Schizosaccharomyces pombe existen dos miembros de esta familia; Nup211, que está implicado en el transporte núcleo-citoplasma y Alm1, cuya función no está caracterizada. La deleción de Alm1 (Alm1D) es viable aunque presenta un cierta tasa de muerte celular. Un análisis detallado mediante microscopia nos ha permitido demostrar que Alm1 activa el mecanismo de supervivencia del ensamblaje del huso mitótico (spindle assembly check-point o SAC) presentando un retraso en la transición Metafase-Anafase. En general, este check-point se activa cuando el huso esta mal ensamblado y/o no se ha producido la captura de todos los cinetocoros. Este retraso es dependiente de la proteína quinasa Bub1p. Consistente con esta observacion, la falta de función de alm1 es extremadamente sensible en un fondo genético delecionado en varios componentes clave del SAC, como Mph1, Bub1, Bub3 y Mad2. Para caracterizar si el mecanismo de captura de cromosomas durante mitosis estaba alterado en el cepa Alm1D se marcaron los cinetocoros y los SPB con distintos marcadores y se realizó la filmación de estas células a intervalos de 1 minuto. En estas condiciones, se observó que la segregación de las cromátidas durante mitosis era a menudo asimétrica, produciendose un reparto desigual entre ambas células hijas. Además, en la cepa delecionada para alm1 era muy frecuente la presencia de >lagging chromosomes> o cromosomas retrasados durante la separación del huso durante anafase B. Esto suele ser indicativo de un defecto en la captura de los cromosomas. Alm1-GFP localiza en el complejo del poro nuclear y co-localiza parcialmente con el SPB. Alm1 colocaliza en el poro nuclear con Mad2 durante interfase y es necesario para la correcta localización de este componente del check-point del huso en los NPC durante interfase. Nuestros datos son consistentes con un modelo en el que la falta de función de Alm1 produce defectos estructurales en los SPBs que hacen muy ineficiente la captura de cromosomas. Alternativamente una fracción de Alm1, indetectable con la metodología empleada, podría localizar en los cinetocoros para asistir en la captura de los mismos.