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Título

Identification and characterization of new proteins associated with autophagy in the model system Dictyostelium discoideum

Otros títulosIdentificación y caracterización de nuevas proteínas asociadas a autofagia en el sistema modelo Dictyostelium discoideum
AutorPinto Ferreira de Mesquita, Ana Filipa
DirectorEscalante, Ricardo
Fecha de publicación2014
EditorUniversidad Autónoma de Madrid
Resumen[ES]: Hemos estudiado la red de interacciones proteina-proteina en el proceso de la autofagia en el sistema modelo Dictyostelium discoideum usando ensayos de doble hibrido y pulldown de las proteínas conservadas Atg1 y Atg8. Estos análisis confirmaron interacciones esperadas descritas en otros organismos pero también permitieron la identificación de nuevos interactores que ponen de manifiesto la compleja regulación de la ruta autofágica. El complejo de la serina/treonina quinasa Atg1, un regulador esencial de la autofagia fue investigado en detalle. La composición del complejo Atg1 en Dictyostelium discoideum es mas similar a células de mamífero que a las de levaduras ya que además de Atg13, este organismo posee Atg101, una proteína no conservada en hongos. Hemos descubierto que Atg101 interacciona con Atg13 y que la anulación de estas proteínas en Dictyostelium lleva a un bloqueo temprano de la autofagia, aunque la severidad del fenotipo de desarrollo y el grado de bloqueo de la autofagia es más severo en células deficientes en Atg13. Hemos identificado una proteína conteniendo dominios zinc-finger B-box y FNIP que es un interactor de Atg101. La mutación del gen que codifica esta proteína reduce pero no anula el flujo autofágico, lo que sugiere que funciona como un regulador positivo de Atg101. Describimos además la interación de Atg1 con la enzima de la ruta de las pentosas fosfato transketolasa. Encontramos alteraciones en la actividad de la transketolasa endógena en cepas que sobrexpresan o que son deficientes en Atg1. Esto sugiere la presencia de una nueva vía de regulación entre la autofagia y la ruta de las pentosas fosfato en Dictyostelium discoideum.
[EN]: The network of protein-protein interactions of the Dictyostelium autophagy pathway was investigated by yeast two-hybrid and pull-down of the conserved autophagic proteins Atg1 and Atg8. These analyses confirmed expected interactions described in other organisms but also identified novel interactors that highlight the complexity of autophagy regulation. The serine/threonine kinase Atg1, an essential regulator of autophagy, was investigated in detail here. The composition of the Atg1 complex in Dictyostelium discoideum is more similar to mammalian cells than to yeast since, besides Atg13, it contains Atg101, a protein not conserved in fungi. We found that Atg101 interacts with Atg13 and genetic disruption of these proteins in Dictyostelium leads to an early block in autophagy, although the severity of the developmental phenotype and the degree of autophagic block is higher in Atg13 deficient cells. We have also identified a protein containing a zinc-finger B-box and FNIP motifs that interacts with Atg101. Disruption of this protein reduces but do not abolish autophagic flux suggesting that it functions as a positive regulator of Atg101. We also describe the interaction of Atg1 kinase with the pentose phosphate enzyme transketolase. We found changes in the activity of endogenous transketolase activity in strains lacking or overexpressing Atg1 suggesting the presence of an unsuspected regulatory pathway between autophagy and the pentose phosphate pathway in Dictyostelium.
DescripciónTesis Doctoral presentada por Ana Filipa Pinto Ferreira de Mesquita, licenciada en Bioquímica por la Universidad de Oporto (Portugal), para optar al grado de Doctor por la Universidad Autónoma de Madrid, y realizada en el Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols (CSIC-IIBM).-- Esta obra está bajo una licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Sin Obra Derivada 4.0 Internacional.
URIhttp://hdl.handle.net/10261/126095
Aparece en las colecciones: (IIBM) Tesis
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