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Título

Estudio proteómico de la fosforilación de proteínas nucleares inducida por Acido Retinoico en células de neuroblastoma

AutorLaserna Mendieta, Emilio J.; Valero, L.; Sanchez Del Pino, M.; Calvete, Juan J. ; Barettino, Domingo
Fecha de publicación7-mar-2008
CitaciónI Jornada conjunta GenProt de la Redes Catalana y Valenciana de Genómica y Proteómica. (2008)
ResumenEl Ácido Retinoico (RA), la forma activa de la vitamina A, induce en células de neuroblastoma SH-SY5Y la diferenciación neural. Además de sus acciones transcripcionales clásicas regulando la expresión de genes concretos, el RA actúa también de un modo extra-genómico, modulando la actividad de rutas de transducción de señal. En particular, el tratamiento con RA activa la vía de señalización PI3K/Akt y de la MAP kinasa ERK, siendo la activación de la primera un requisito necesario para la diferenciación neural. Para intentar descubrir proteínas novedosas diana de las acciones no genómicas del RA, iniciamos un abordaje proteómico, basado en la comparación de geles bidimensionales de extractos de fosfoproteínas nucleares (control y tratadas 30 min con RA) purificadas por cromatografía de afinidad. Esta estrategia nos permitió identificar por espectrometría de masas una serie de proteínas que varían su fosforilación en respuesta al tratamiento con RA: nucleofosmina/B23, hnRNP-C1/C2, hnRNP-K, HMGB1, PABP2 y la histona H1.5. La fosforilación de estas proteínas ha sido estudiada más a fondo mediante experimentos de desplazamiento horizontal en western blot bidimensional e inmunoprecipitación. Con el objetivo de superar las limitaciones que tiene esta estrategia proteómica tradicional y ampliar los resultados obtenidos, se recurrió a un ensayo LC-MS/MS basado en el iTRAQ (isolated tags for relative and absolute quantification) partiendo igualmente de proteínas nucleares previamente enriquecidas en fosfo-proteínas por cromatografía de afinidad. El iTRAQ permite cuantificar la cantidad relativa de proteínas hasta en cuatro muestras distintas. El número de proteínas identificadas es mucho mayor y los valores relativos para la cuantificación son muy precisos y sometidos a un test estadístico para hallar su significación. El análisis preliminar de los resultados obtenidos hasta el momento muestra que proteínas pertenecientes a un mismo grupo sufren modificaciones en su estado de fosforilación similares. Ambas estrategias conducen hacia la hipótesis de que el RA podría influir en la respuesta transcripcional asociada a la diferenciación a través de la fosforilación de proteínas nucleares, bien factores de transcripción específicos, bien proteínas que participan en procesos más generales (modificación de cromatina, procesado de mRNA, transporte al citoplasma, etc.).
DescripciónPóster original presentado I Jornada conjunta GenProt de la Redes Catalana y Valenciana de Genómica y Proteómica, celebrado en Peñíscola (Castellón), el 7 de marzo de 2008
URIhttp://hdl.handle.net/10261/123173
Aparece en las colecciones: (IBV) Comunicaciones congresos
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