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Title

Aislamiento y cultivo de protoplastos del patrón ciruelo ‘Mariana 2624’ (Prunus cerasifera Ehrh x P. munsoniana W. Wight & Hedrick)

Other TitlesIsolation and culture of protoplasts from the plum rootstock ‘Marianna 2624’ (Prunus cerasifera Ehrh x P. munsoniana W. Wight & Hedrick)
AuthorsAndreu Puyal, Pilar ; Arbeloa Matute, Arancha ; Terrén, N.; Marín Velázquez, Juan Antonio
Keywordsespecies frutales
pectoliasa
cefotaxima
fruit-tree species
pectolyase
darkness
Issue DateDec-2008
PublisherAsociación Interprofesional para el Desarrollo Agrario
CitationAndreu, P., [et al.], Aislamiento y cultivo de protoplastos del patrón ciruelo ‘Mariana 2624’ (Prunus cerasifera Ehrh x P. munsoniana W. Wight & Hedrick), ITEA-Información Técnica Económica Agraria, 104 (4): 482-492.
Abstract[ES] La utilización del cultivo de protoplastos en especies frutales está limitada entre otras razones, por la falta de reproducibilidad de los resultados obtenidos previamente. En este trabajo se concluye la importancia de definir con precisión, no solo las condiciones de aislamiento y cultivo de los protoplastos, sino del estado fisiológico del material vegetal, que ha mostrado una gran influencia. La inclusión de pectoliasa entre las enzimas para la digestión de la pared celular en tejidos foliares fue decisiva para el éxito, obteniendo mejores resultados con la combinación de celulasa Onozuka R-10, pectoliasa y macerozima. El número de protoplastos aislados obtenidos aumentó tras someter a los brotes a un periodo de oscuridad de 7 días. Con brotes etiolados, la utilización de la solución M38 para la prepasmólisis y la digestión enzimática aumentó notablemente, tanto el rendimiento, como la viabilidad, que fueron máximas cuando, además, los brotes fueron cultivados en un medio con zeatina. La cefotaxima, aunque no tuvo un efecto en el aislamento de los protoplastos, sí que influyó positivamente en el cultivo de protoplastos permitiendo la división celular y formar grupos celulares de hasta 10 células.
[EN] Protoplast culture in fruit tree species is limited, among other reasons, by the lack of reproducibility of previous results. In this work, we show that a precise definition, of the protoplast isolation and culture conditions, as well as the characterization of the physiological state of plant material are particularly important, since they greatly affected both yield and viability. The inclusion of pectolyase among the enzymes for cell wall digestion was critical. We got best results with a combination of Onozuka R-10, pectolyase and macerozyme. Yield increased during protoplast isolation when donor shoots were previously cultured in darkness for 7 days. When etiolated shoots were used, both yield and viability increased significantly when M38 solution was used for both pre-plasmolysis and enzyme digestion. In addition, maximum yield and viability were achieved when shoots were cultured in a medium with zeatin. Cefotaxime did not affected protoplast isolation but had a positive effect in protoplast culture, allowing cell division and cell aggregates of up to 10 cells.
DescriptionLa versión definitiva del editor está disponible en: http://www.aida-itea.org/revista.html
URIhttp://hdl.handle.net/10261/11747
ISSN1699-6887
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