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Title

Estudios funcionales de splicing de los exones 16 y 17 de BRCA1 mediante minigenes híbridos

Other TitlesSplicing functional assays of a BRCA1 minigene with exons 15-19
AuthorsHernández-Moro, Cristina; Curiel-García, Álvaro; Díez-Gómez, Beatriz; Acedo, Alberto ; Infante, Mar ; Durán, Mercedes ; Velasco, Eladio
Issue Date2013
CitationAEGH 2013
AbstractSe estima que aproximadamente el 10% del cáncer de mama (CM) es hereditario. Mutaciones deletéreas en los principales genes responsables, BRCA1 y BRCA2, aumentan hasta 20 veces el riesgo de CM. Datos publicados (Sanz DJ et al 2010) muestran que un tercio de las mutaciones patogénicas afectan al procesamiento del pre-ARNm por lo que sería un mecanismo relevante en la susceptibilidad a cáncer de mama/ovario hereditario. Los plásmidos reporteros de splicing, como pSPL3, son una herramienta de gran utilidad para el estudio del impacto en el splicing de una variante de ADN sin necesidad de una muestra del paciente. Hemos construido un minigen híbrido en un vector derivado de pSPL3 que contiene los exones 15-16-17-18-19 de BRCA1. Se comprobó que el minigen wild type producía el ARNm del tamaño esperado (893 nucleótidos) por lo cual era adecuado para la realización de ensayos funcionales de splicing de variantes de ADN candidatas. Se ensayaron funcionalmente 34 mutaciones previamente reportadas en pacientes con CM en los exones 16 y 17 de BRCA1 que fueron preseleccionadas con los programas NNSplice y HSF. Éstas fueron introducidas en el minigen wild type mediante mutagénesis dirigida y se realizaron los ensayos funcionales mediante transfección en células de tumor mamario MCF7 para identificar patrones anómalos de splicing. Estos resultados se compararon con los obtenidos a partir de linfocitos de pacientes portadoras de Castilla y León. Nuestros datos muestran que los minigenes híbridos constituyen una tecnología poderosa para la clasificación de variantes de ADN de significado clínico incierto. El objetivo final de estos estudios es incrementar el número de pacientes que se pueden beneficiar de las medidas preventivas; ventajas que se relacionan directamente con una mejor caracterización molecular de la enfermedad de estudio.
DescriptionPóster presentado al XXVII Congreso Nacional de la Asociación Española de Genética Humana celebrado en Madrid del 10 al 12 de abril de 2013.
URIhttp://hdl.handle.net/10261/117295
Appears in Collections:(IBGM) Comunicaciones congresos
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