2024-03-29T00:51:49Zhttp://digital.csic.es/dspace-oai/requestoai:digital.csic.es:10261/1996322021-10-01T11:54:17Zcom_10261_129com_10261_6col_10261_508
María, Nuria de
Guevara, Angeles
González-Sama, Alfonso
Felipe, Mª Rosario de
Serra, María Teresa
García-Luque, Isabel
Fernández-Pascual, Mercedes
2020-02-04T11:41:54Z
2020-02-04T11:41:54Z
2004-06-15
X Reunión Nacional de Fijación de Nitrógeno (2004)
http://hdl.handle.net/10261/199632
El glifosato es uno de los herbicidas más empleados actualmente en cultivos agrícolas,
por su inmovilidad, rápida inactivación y degradación en el suelo (2). En trabajos
anteriores (1), hemos comprobado que este herbicida produce un rápido descenso de la
actividad fijadora de nitrógeno así como ligeras alteraciones en el patrón polipeptídico
de hojas y nódulos de plantas de Lupinus albus cv. Multolupa, inoculadas con
Bradyrhizobium sp. (Lupinus) cepa ISLU-16. Sin embargo, la mayor alteración
encontrada fue la presencia de un polipéptido de 44 kDa (44K) en el citosol bacteroidal,
que no se detectaba en el citosol de bacteroides de plantas control. Se ha llevado a cabo
la identificación de esta proteína mediante la secuenciación de su región N-terminal, la
caracterización de sus genes codificadores, el análisis del patrón de expresión de su
mRNA y el análisis de su estructura.
El análisis de la secuencia nucleotídica de su gen codificador y de las secuencias
aminoacídicas deducidas, mostraron que el polipéptido 44K posee una elevada
homología de secuencia con porinas de la membrana externa de otras bacterias Gram
negativas. Los ensayos de Southern del DNA genómico de la cepa ISLU-16 son
indicativos de que esta proteína está codificada por un único gen en el genoma
bacteriano. El patrón de expresión del gen mediante Northern de los RNA aislados de
nódulos tratados con distintas dosis de herbicida, reveló una expresión constitutiva
basal que se incrementa en los tratamientos con altas dosis de herbicida (5 y 10 mM),
indicando que la expresión del polipéptido 44K está regulada transcripcionalmente. En
la bacteria en vida libre se detectó sólo acumulación de RNA, cuando fue crecida en
ausencia de glifosato, indicando diferencias en su patrón de expresión en vida libre y en
simbiosis.
Finalmente, hemos analizado la estructura de la proteína 44K. Se han
identificado dos motivos: uno de asociación a membrana, próximo a la región C-t y otro
característico de la subfamilia de porinas, situado a 30 aa de la región N-t. La
estructura secundaria contiene esencialmente lámina β y un posible dominio
transmembrana β-barrel correspondiente a la cadena P de una porina específica de
sacarosa, presente en proteínas de membrana externa de enterobacterias.
Actualmente se están estudiando la(s) posible(s) función(es) de esta proteína en
la respuesta del microsimbionte frente al tratamiento con herbicidas.
closedAccess
Estructura y expresión diferencial de una posible porina de Bradyrhizobium sp. (Lupinus) en vida libre y en simbiosis inducida por glifosato
póster de congreso