Cultivo in vitro de Embriones Inmaduros en tres Citotipos de Brachyopodium distachyon (L.) P. Beauv

Abstract

[ES] En este trabajo se ha analizado la respuesta al cultivo in vitro de muestras de seis poblaciones de Brachy- podium distachyon (dos por cada uno de los citotipos 2n = 10; 2n = 20; 2n = 30), para lo cual se ha par- tido de embriones cigóticos inmaduros que fueron sembrados en nueve medios de inducción de callos (BR1 a BR9), que se diferenciaban entre sí en el regulador de crecimiento utilizado (Ácido 2,4-Diclorofenoxia- cético (2,4-D), Piclorán o Dicamba) y en su concentración (1, 2 ó 4 mg/l). Para cada uno de los medios uti- lizados se han realizado cuatro repeticiones de 20 embriones por tratamiento. Los resultados obtenidos fueron analizados posteriormente mediante un análisis de la varianza (ANOVA) de las variables: nº de ca- llos totales/nº total de embriones (TC); nº de callos compactos/nº total de callos (CC); nº de callos blandos/nº total de callos (SC). La respuesta ha sido muy variable, tanto para el número como para el tipo de callo formado, dependiendo de la población y el medio de cultivo empleado. Así, las muestras con 2n = 30 cro- mosomas son las que han dado lugar a un mayor número de callos totales y también de callos embrio- génicos. La mejor respuesta se obtuvo en aquellos medios de cultivos que contenían 2,4-D, con indepen- dencia de la concentración. Los callos obtenidos se distribuyeron al azar en cuatro grupos y se sembraron en un medio de regeneración (G1) conteniendo BAP (0,5 mg/l) y se incubaron en una cámara climática con un fotoperiodo de 14 h de luz y 22ºC de temperatura constante. Al cabo de un mes se contabilizó el nú- mero de brotes formados (verdes o albinos) y se calcularon las siguientes variables: nº de brotes totales (verdes+ albinos)/nº total de callos (TSV), nº de brotes verdes/nº total callos (TSVC), nº de brotes verdes a partir de callos compactos/nº total callos compactos (SCC), nº de brotes verdes a partir de callos blandos/nº total callos blandos (SSC) y nº total brotes verdes/nº total embriones (R). Los ANOVA de estas variables, re- velaron diferencias significativas entre las poblaciones para cada una de las variables estudiadas. Los seis genotipos han sido clasificados en función de su aptitud para la regeneración de plantas a par- tir del cultivo in vitro de embriones inmaduros (variable R). Así, las dos poblaciones con 2n = 30 cro- mosomas, Bd238 y Bd341, fueron las de mejor comportamiento mientras que las poblaciones Bd160 y ‘Zulema’ con 2n = 10 cromosomas, mostraron la respuesta más baja.

[EN] In this work the in vitro culture response of six population samples of Brachypodium distachyon (two by each one of the cytotypes of 2n = 10 2n = 20; 2n = 30) has been analyzed. Immature zygotic embryo were seeded for callus induction in nine culture media (BR1 to BR9), that were different to each other in the growth regulator kind of (2, 4-dichlorophenoxyacetic acid (2, 4-D), Picloran or Dicamba) and con- centration (1, 2 or 4 mg/l), with four repetitions with 20 embryos per treatment. Results were subse- quently analyzed using an ANOVA test for the following variables:TC = total calluses number / total em- bryos number; CC = compact calluses number / total calluses number; SC = soft calluses number/ total calluses number. A very different response among them, as much for the number as for the type of cal- lus developed, has been observed, based on the genotype and culture medium used. Thus, the sam- ples with 2n = 30 chromosomes gave rise to a greater number of total calluses and embryogenic cal- luses. The culture mediums that induced the best response were those that contained 2, 4-D in all the concentrations tested. The obtained calluses were distributed in four repetitions and they were seeded in the regeneration media containing N6-benzyl-aminopurine BAP (0.5 mg/l) and were transferred to a chamber growth with a photoperiod of 14 h light and a constant temperature of 22ºC. After a month, the number of developed buds (green or albinos) was counted and were estimated the following vari- ables: TSV = total number of buds (green + albinos) / total number of calluses; TSVC = number of green buds / total number of calluses; SCC = number of green buds from compact calluses / total number of compact calluses; SSC = number of green buds from soft calluses /total number of soft calluses; Total green buds/total immature embryos (R). The ANOVA test for each one of the variables revealed sig- nificant differences between the populations. The study of the variable R, that summarizes the response of the in vitro culture, has allowed classifying the six populations based on its aptitude for the regen- eration of plants from the in vitro culture of immature embryos. Thus, two populations of 2n = 30 chro- mosomes, Bd238 and Bd341 were those of the best behavior, whereas the populations Bd160 and `Zulema’ with 2n = 10 chromosomes, showed the lowest response.