Generación de ratones transgénicos con expresión específica de Recombinasa Cre en megacariocitos

Abstract

Para poder estudiar los efectos de la anulación de expresión de los genes cuyos productos proteicos son cruciales durante el desarrollo, se generan los ratones ¿Knock Out¿ condicionales. En estos animales, se induce la anulación de expresión del gen de interés en el animal adulto, lo que permite un desarrollo embrionario normal. Para generar este tipo de animales, se emplea el sistema de recombinación Cre/loxP. El sistema Cre-loxP es la estrategia más utilizada en la mutagénesis dirigida, especí fica de tejido. La colocación y orientación de los sitios loxP (que se introducen en la secuencia de ADN a recombinar) determinarán la secuencia genómica a escindir, mientras que la disponibilidad, en el tiempo y/o el espacio, de la recombinasa Cre, que se obtiene a partir de un transgén dictará cuando y dónde se produce la recombinación y, por tanto, el ¿knock-out¿. Los sitios loxP se disponen en parejas flanqueando el segmento de ADN a eliminar. Cuando cre se expresa, la recombinasa Cre se une a los sitios loxP, los corta por la mitad y después une las dos mitades restantes tras haber eliminado el ADN situado entre ambos. El objetivo principal de nuestro trabajo ha sido la generación de ratones transgénicos con expresión específica de cre en megacariocitos y plaquetas y su verificación funcional. Generamos ratones transgénicos mediante microinyección de nuestra construcción de ADN en pronúcleos de oocitos fecundados. Conseguimos generar un total de 4 líneas de animales con transmisió n del transgén por vía germinal. La intensidad de la expresión del transgén cre la verificamos mediante generación de ratones doble transgénicos m-alfaIIb-Cre / Rosa26-lacZ. En estos animales la acción de la recombinasa Cre generó cantidad suficiente de la beta-galactosidasa como para desarrollar color de X-Gal específicamente en megacariocitos y plaquetas. Nuestros resultados abren la posibilidad de explorar numerosas etapas de control, tanto metabólicas como del desarrollo, actuando sobre gen es ¿floxed¿ de importancia reguladora en megacariocitos. Dada la viabilidad así como la ausencia de alteraciones funcionales detectables, los ratones transgénicos m-alfaIIb-Cre, ofrecen una herramienta de potencial valor biológico y de aplicabilidad inmediata.