Saneamiento in vitro de 'Douce de Djerba', una variedad de manzano micropropagada

Abstract

[ES] Se describe la aplicación de un método sencillo y eficaz para controlar una contaminación endógena bacteriana en cultivos in vitro de brotes de manzano, que mostraron crecimiento de bacterias de origen endógeno, mediante el subcultivo sucesivo de los ápices en medio de cultivo con cefotaxima. Las bacterias endógenas son frecuentes en cultivos in vitro iniciados a partir de explantos tomados de árboles adultos crecidos en campo y afectan tanto al crecimiento de brotes como a la organogénesis de brotes y raíces adventicias. Utilizamos brotes de manzano del cv. 'Douce de Djerba' cultivados in vitro que mostraban crecimiento bacteriano en la base de los brotes. Mientras que tratamientos de 1 h con soluciones de hipoclorito de sodio al 0.1 % o al 1.0 % dañaron los brotes y fueron ineficaces, la adición de cefotaxima estéril al medio autoclavado (MS modificado) a 150 mg l-1 inhibió el crecimiento bacteriano y mejoró tanto el crecimiento de los brotes como la expansión de las hojas. Tras el tercer subcultivo en medio con cefotaxima, no se detectó ningún crecimiento bacteriano en el medio, tanto en el medio de cultivo como en placas PYGA. La longitud de los brotes tratados con cefotaxima fue el doble que la de los brotes sin tratar (32.7 ± 2.71 mm vs. 15.95 ± 1.48 mm respectivamente). El método descrito aquí permitirá el control de bacterias endógenas sensibles a la cefotaxima in vitro, eliminando una fuente de variabilidad incontrolada que puede afectar diferentes estudios.

[EN] We describe here the application of a simple and efficient method to control an endogenous bacterial contamination of in vitro shoot cultures of apple through successive subcultures of shoot apices on media with cefotaxime. Endogenous bacteria are frequent in cultures derived from explants taken from adult trees grown in the field and affect both shoot growth and organogenesis as in the adventitious regeneration of shoots and roots. We used apple shoots cv. 'Douce de Djerba' cultured in vitro that showed bacterial growth at the base of the shoots. While 1 h treatments with 0.1 % or 1.0 % sodium hypochlorite were harmful and ineffective, the addition of sterile cefotaxime to autoclaved culture medium (a modified MS medium) at 150 mg l-1 improved both shoot length and leaf expansion inhibiting bacterial growth. After the third subculture on medium with cefotaxime no visible bacterial growth was detected and shoots grown on MS without cefotaxime did not show any bacterial growth both in the culture medium and in PYGA plates. Length of cefotaxime-treated shoots was twofold that of untreated shoots (32.7 ± 2.71 mm vs. 15.95 ± 1.48 mm respectively). The method described here would allow the control of endogenous bacteria that are sensitive to cefotaxime in in vitro cultures, removing a source of uncontrolled variability that could affect different studies.