Evaluación de la capacidad de producción de líneas CRISPR/Cas9 doblehaploides del cultivar de trigo panadero Bobwhite

Abstract

La obtención de plantas doblehaploides (DH) cobra una especial importancia cuando se usa en combinación con las técnicas de edición génica como CRISPR/Cas9 ya que nos permite obtener líneas homocigóticas en una sola generación. Bobwhite es el cultivar modelo utilizado para obtener plantas editadas de trigo panadero con bajo contenido en gluten (Sánchez-León y col 2018). La eficiencia de Bobwhite para la producción de plantas DH mediante cultivo de anteras es baja. En este estudio se ha aplicado el protocolo descrito por Castillo et al. (2015) para la obtención de plantas DH de 9 cruzamientos F1, en los que intervienen al menos una línea CRISPR/Cas9 de Bobwhite. Los resultados obtenidos en este estudio confirman que la capacidad de este cultivar para el cultivo de anteras es baja. Uno de los factores más limitantes es el bajo porcentaje de regeneración, debido a una mala calidad de los embriones. Además, los bajos porcentajes de duplicación cromosómica espontánea, con valores inferiores al 25% en la mitad de los cruzamientos, han hecho necesario la aplicación de colchicina para inducir la duplicación cromosómica. El albinismo no fue un factor limitante ya que en ninguno de los cruzamientos se obtuvieron más de un 25% de plantas albinas. Se observó una gran variabilidad para la respuesta al cultivo de anteras entre todos los cruzamientos. El menor número de plantas verdes/100 anteras (1,38) se obtuvo a partir de un cruzamiento entre dos líneas de Bobwhite, siendo todas haploides. El cruzamiento de Bobwhite x Arthur Nick produjo el mayor número de plantas verdes/100 anteras (10) y un 50 % de autoduplicación. Sin embargo, en el cruzamiento de Bobwhite por el otro cultivar de interés agronómico, Anza, se obtuvieron valores similares al resto de los cruzamientos.