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Title

Aislamiento de neutrófilos a partir de sangre periférica en pequeños rumiantes: visualización y cuantificación de trampas extracelulares en animales vacunados frente a paratuberculosis

AuthorsArteche, N.; Pérez Pérez, Valentín ; Elguezabal, Natalia; Ferreras, Mª del Carmen ; Benavides, Julio ; Gutiérrez-Expósito, D.
Issue Date2018
PublisherSociedad Española de Anatomía Patológica Veterinaria
CitationXXX Reunión de la Sociedad Española de Anatomía Patológica Veterinaria: 29 (2018)
AbstractLos neutrófilos juegan un papel crucial en la eliminación de agentes patógenos durante la respuesta inmunitaria innata gracias a su capacidad fagocítica y a la producción de especies reactivas del oxígeno. Además, con el fin de eliminar agentes patógenos, los neutrófilos son capaces de generar unas fibras extracelulares compuestas por ADN, péptidos antimicrobianos, enzimas e histonas llamadas “trampas extracelulares de neutrófilos” (NETs). El estudio in vitro de dichas NETs se lleva a cabo a partir de neutrófilos de sangre periférica. No existe un consenso para el aislamiento de neutrófilos en pequeños rumiantes, existiendo diversas metodologías en la bibliografía. En el presente estudio se utilizaron dos gradientes de densidad (Lymphoprep™ y Percoll®) con diferentes concentraciones y combinaciones de las mismas, así como diferentes velocidades de centrifugación. La pureza del aislamiento se comprobó mediante tinción con “Diff-quick2. El uso de Lymphoprep™ permitió el aislamiento de poblaciones de neutrófilos con una pureza del 90% y una viabilidad del 98% mientras que con el Percoll® se aislaban tanto células mononucleares como neutrófilos y además el número de células era insuficiente para estimar su pureza. Para valorar la producción de NETs in vitro, se llevó a cabo su visualización microscópica empleando el marcador fluorescente DAPI y su cuantificación mediante la técnica fluorimétrica Quant-iT PicoGreen®, a partir de neutrófilos aislados de sangre de ovejas y cabras vacunadas y no vacunadas frente a Mycobacterium avium subsp paratuberculosis (Map) tras su incubación con Staphylococcus aureus, Corynebacterium pseudotuberculosis, Map y Mycobacterium bovis. Se lograron visualizar NETs tras la infección con los diferentes agentes. Su cuantificación no arrojó diferencias significativas entre los animales vacunados y sin vacunar en ambas especies ni entre las distintas bacterias empleadas. Aunque se trata de un estudio preliminar, estos resultados sugerirían que la vacunación frente a Map no influiría en la respuesta de los neutrófilos frente a estos agentes.
DescriptionComunicación oral presentada a la: XXX Reunión de la Sociedad Española de Anatomía Patológica Veterinaria (SEAPV). San Pedro del Pinatar, Murcia, 13-15 junio 2018.
Publisher version (URL)http://www.uco.es/grupos/seapv/index.php?sec=4
URIhttp://hdl.handle.net/10261/180052
Appears in Collections:(IGM) Libros y partes de libros
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