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Title

Actividad citocromo P450 aromatasa en la lubina (Dicentrarchus labrax L.)

AuthorsGonzález Cabeza, Alicia
AdvisorPiferrer, Francesc
Issue DateFeb-2003
PublisherUniversidad de Barcelona
AbstractA pesar de que la lubina ha sido objeto de numerosos trabajos sobre su cultivo, desarrollo y reproducción, aún no se conoce bien su mecanismo de determinación y diferenciación sexual. Por ello, y debido a la importancia de la aromatasa en este proceso, así como en la síntesis de neuroestrógenos, el objeto global de esta investigación fue el estudio de la actividad aromatasa en la lubina. Los objetivos específicos fueron:
1. Puesta a punto y validación de un método para medir la actividad aromatasa en la lubina. En esta investigación se pretendía optimizar las condiciones del ensayo más empleado, el método del agua tritiada, para determinar la actividad en nuestra especie de interés. Era importante poner a punto este método, especialmente debido al riesgo que existe de medir pseudo-aromatasa si se pretende detectar niveles bajos de la actividad de dicho enzima. Para ello, se tomó en cuenta, por primera vez en este tipo de análisis en peces, todas las variables que le son propias: temperatura y tiempo de incubación, concentración de tejido fresco, sustrato y cofactores, pH y molaridad del tampón, así como un análisis de su especificidad, localización subcelular y confirmación del ensayo con el método directo de medida de estrona.
2. Determinación de las propiedades catalíticas de la aromatasa de la lubina. Con el método puesto a punto y validado, y basado en que existen dos isoformas en algunas especies de peces, se planeó comprobar la existencia de dos actividades catalíticas del enzima. Además sólo existían estudios transfectando células COS o CHO (Trant et al., 2001; Zhao et al., 2001) pero no con el enzima nativo ni para ninguna especie marina como se analiza en este trabajo. Las propiedades catalíticas comprendieron la constante de afinidad (Km) y la velocidad de reacción (Vmax).
3. Distribución de la actividad aromatasa. Si bien es conocida la distribución de actividad aromatasa en mamíferos, en vertebrados inferiores sólo se había estudiado en algunas especies y en pocos órganos. Por ello, en este trabajo se analizó dicha actividad enzimática en diversos órganos. Igualmente, era importante estudiar la distribución neuroanatómica, puesto que se había demostrado la excepcional actividad aromatasa en el encéfalo de algunos teleósteos.
4. Cambios de la actividad aromatasa con el ciclo reproductor. Debido a la importancia demostrada de la actividad aromatasa en el balance entre andrógenos y estrógenos y la implicación de éstos en la reproducción, se estudiaron los cambios de la actividad aromatasa a lo largo del año y correlacionaron con el estadio reproductor, así como con los niveles de esteroides sexuales en plasma.
5. Actividad aromatasa durante los primeros estudios del desarrollo y la diferenciación sexual. La existencia de estudios que muestran la implicación de la actividad aromatasa en el proceso de diferenciación sexual motivo el estudiar su distribución a lo largo del primer año de vida y en función del sexo, para intentar averiguar el posible rol de este enzima en el mencionado proceso de la lubina.
6. Por último, mencionar que durante el transcurso de la validación del método de agua tritiada surgió una nueva pregunta originalmente no planteada sobre la regulación de la actividad aromatasa. En relación con el metabolismo de la androstenediona, se estudiaron los posibles efectos de los andrógenos 11β-hidroxilados sobre la actividad aromatasa en el cerebro y ovario de la lubina.
Description241 páginas.-- Tesis desarrollada en el Departamento de Recursos Marinos Renovables del Instituto de Ciencias del Mar (ICM-CSIC) y en el Departament de Fisiologia de la Universitat de Barcelona.-- Fecha de presentación: 2003/02/21.
Publisher version (URL)http://www.tdx.cat/TDX-0718103-110755
URI10261/16878
ISBN84-688-2998-6
Appears in Collections:(ICM) Tesis
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