Efecto de diferentes concentraciones de los antioxidantes melatonina, crocina y trolox sobre la calidad seminal a la descongelación en Ciervo Ibérico

Abstract

El objetivo del trabajo que a continuación se expone fue estudiar el efecto de la adición en el diluyente de congelación de tres antioxidantes (crocina, melatonina y trolox) a distintas concentraciones, sobre la calidad seminal de espermatozoides de ciervo Ibérico (Cervus elaphus hispanicus) descongelados. El material espermático con el que se trabajó procedió de 26 machos de ciervo ibérico abatidos durante la época de celo (septiembre-octubre) y fue recogido postmortem de la cola del epidídimo. El diluyente de congelación utilizado fue un TRIS-citrato-fructosa adicionado en 2 fracciones. La fracción A se formuló con un 20% de yema de huevo y la fracción B fue realizada igual que la fracción A más un 6% de glicerol. Al diluyente de congelación se le adicionaron los siguientes antioxidantes a las concentraciones finales indicadas obteniéndose 7 tratamientos: crocina (0,5 mM, 0,75 mM, y 1 mM), Melatonina (1 mM, 2,5 mM y 5 mM) y Trolox 1 mM. Además, también se utilizó el diluyente sin antioxidantes como un control. La calidad seminal fue estudiada tras la descongelación y después de dos horas de incubación a 37º C mediante evaluación con microscopía de fases y con citometría de flujo valorándose los siguientes parámetros: motilidad individual, calidad de movimiento y porcentaje de espermatozoides con el acrosoma intacto mediante microscopía de contraste de fases, parámetros descriptores del movimiento evaluados mediante sistemas de imágenes computerizados (CASA), y viabilidad, potencial de la membrana mitocondrial e integridad del ADN mediante citometría de flujo. A la descongelación no se encontraron diferencias significativas para los parámetros de movilidad y de integridad acrosomal. Sin embargo, cuando se evaluó la calidad seminal mediante citometría de flujo se observó que la melatonina añadida a concentraciones de 2,5 y 5 mM al diluyente de congelación produce una disminución en la viabilidad y actividad mitocondrial en comparación con el control y con el antioxidante crocina suplementado en el diluyente de congelación a una concentración 0,75 mM. Además, la utilización de crocina en todas sus concentraciones en el diluyente de congelación permitió disminuir el porcentaje de espermatozoides apoptóticos en relación al control. Por otra parte, cuando se realizó la evaluación seminal tras 2 horas de incubación de las muestras espermáticas a 37 °C se observó, que la velocidad curvilínea (VCL) y el desplazamiento lateral de la cabeza (ALH) fueron menores para las muestras espermáticas congeladas en un diluyente con 5 mM de melatonina. De nuevo, el antioxidante crocina fue el mejor para disminuir el porcentaje de espermatozoides apoptóticos. En conclusión la crocina es un buen antioxidante para mejorar la calidad seminal a la descongelación de espermatozoides epididimarios de ciervo Ibérico.