Detección de Enterococcus gallinarum y E. casseliflavus en muestras fecales de aves salvajes en España

Abstract

[Introducción y objetivos]: Los enterococos resistentes a vancomicina (ERV) pueden presentar mecanismos de resistencia adquirida (ERV‑a), o bien mecanismos intrínsecos de resistencia (ERV‑i) asociados a las especies E. gallinarum y E. casseliflavus (portadores de los genes vanC‑1 y vanC‑2, respectivamente). El objetivo de este estudio fue evaluar la presencia de ERV en muestras cloacales de aves silvestres en su medio natural (cigüeña blanca‑Ciconia ciconia) y en producción semi‑extensiva (perdiz roja‑Alectoris rufa) y analizar los fenotipos y genotipos de resistencia de las cepas obtenidas. [Material y métodos]: Muestras cloacales fueron obtenidas en junio‑2014 de 62 pollos de cigüeña blanca que vivían en 4 colonias distintas durante manejos de anillamiento, y en julio/agosto‑2014 de 127 perdices rojas en 5 granjas cinegéticas, tanto reproductores como pollos nacidos en el año. Estas muestras fueron inoculadas en solución salina y sembradas en placas de Slanetz–Bartley con 4 μg/mL de vancomicina (SB‑van). De cada placa se aislaron dos colonias sugestivas de enterococo/muestra y se mantuvieron las dos cuando presentaron distinta especie o diferente fenotipo de resistencia. Para su identificación se realizaron pruebas bioquímicas y moleculares (PCRs específicas). Se determinó la CMI a vancomicina (VAN) y teicoplanina (TEI) por dilución en agar y la sensibilidad a 10 antibióticos por antibiograma. Se estudió, mediante PCR, el genotipo de resistencia a vancomicina (vanA, vanB, vanC‑1, vanC‑2/3, vanD, vanE o vanG) y la presencia de los genes de resistencia erm(A), erm(B), erm(C), tet(M), tet(K), tet(L), aph(3′)‑IIIa, aac(6′)‑aph(2″), ant(6)‑Ia, drfF, dfrG y dfrK. [Resultados]: Se aislaron enterococos en placas SB‑van (potenciales ERV) en 38 de las 62 muestras de cigüeñas blancas analizadas (61,3%). La prevalencia en tres de las colonias fue similar (entre 34,5 y 38,4%) mientras en una colonia fue del 55,1%. En 2 muestras las 2 cepas pertenecieron a distinta especie estudiándose un total de 40 cepas diferentes, 37 de ellas fueron E. gallinarum y 3 E. casseliflavus (todos ERV‑i). no se detectó ningún aislado ERV‑a. Se detectó ERV‑i en 10 de las 127 muestras de perdices (7,9%) procedentes de 4 de las 5 granjas muestreadas. La prevalencia en reproductores fue del 6% y en pollos del 21%. Se estudiaron un total de 10 cepas, todas ellas E. gallinarum. Los rangos de CMIs para VAN y TEI en las 50 cepas fueron 4‑16 μg/mL y 0,25‑2 μg/mL respectivamente. Se detectó resistencia a los siguientes antibióticos: tetraciclina (48%), eritromicina (31%), gentamicina (2%), estreptomicina (12%), kanamicina (12%), trimetoprim‑sulfametoxazol (2%), ampicilina (2%) y ciprofloxacina (13%). Se identificaron los siguientes genes de resistencia: erm(A) (8%), erm(B) (21%), tet(M)(46%), tet(K) (4%), tet(L) (8%), aph(3′)‑IIIa (12%), aac(6′)‑aph(2″) (2%), ant(6)‑Ia (12%), drfF(2%), y dfrG(2%). [Conclusiones]: Se detectó una alta prevalencia de ERV‑i (especialmente E. gallinarum) en las muestras fecales de cigüeñas blancas (61,3%), siendo mucho menor en perdices (7,9%). Sin embargo, no se detectó ERV‑a en ninguna de estas especies animales. Los aislados de E. gallinarum presentan una gran diversidad de genes de resistencia a antibióticos.