Influencia del ambiente en la extracción de ADN, a partir de hojas, para la identificación precoz de híbridos interespecíficos de Prunus mediante pruebas de paternidad basadas en la PCR

Abstract

[ES] Se ha observado la conveniencia de realizar una selección precoz mediante tests de paternidad basados en la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa), en plantas micropropagadas derivadas de cultivo in vitro de embriones inmaduros en un programa de mejora de patrones basado en cruzamientos interespecíficos. Los tests de paternidad nos han permitido cribar los clones no híbridos durante la fase inicial de propagación y reducir la incidencia de las polinizaciones accidentales. En este trabajo se estudia la eficiencia de la extracción de ADN, para la realización de los test de paternidad, de tejidos foliares de plantas crecidas en diferentes ambientes y medios de cultivo. Las hojas de las plantas in vitro se han visto afectadas tanto por el ambiente como por la composición del medio de cultivo, modificando la relación PS/PF (peso seco/peso fresco) y la extracción de ADN. Las plantas de campo mostraron el mayor PF por unidad de superficie y la mayor relación PS/PF, sin embargo, las plantas sombreadas crecidas en invernadero proporcionaron la mayor concentración de ADN extraído. Las plantas cultivadas in vitro en un medio con BAP (bencilaminopurina) mostraron menor concentración de ADN extraído que las plantas ex vitro, pero mayor que las plantas cultivadas en medio con ZEA (zeatina) que mostraron la menor cantidad de PF por superficie. Estos resultados se discuten en términos de la optimización de la extracción de ADN y del efecto del ambiente y del medio de cultivo en los tejidos foliares de las plantas.

[EN] Effect of the environment in DNA leaf extraction for the early identification of Prunus interspecific hybrids through PCR paternity tests Early selection in a breeding program has been performed applying PCR (Polymerase Chain Reaction) paternity tests to micropropagated plants derived from in vitro germinated embryos. Paternity tests allowed us to screen out non-hybrid clones during the initial propagation phase and thus reducing the incidence of accidental pollinations. In this work the efficiency of DNA extraction for paternity tests from foliar tissues of plants grown under different environments and culture media is studied. In vitro plant leaves have been affected by both the environment and the culture media composition, modifying the ratio DW/FW (dry weight/fresh weight) and the DNA extraction performance. The highest FW per cm-2 and the highest DW/FW ratio were found in field plants, however, shaded plants grown in a greenhouse yielded the highest extracted DNA concentration. In vitro plants cultured on BAPcontaining medium showed lower extracted DNA concentration than ex vitro plants, but higher than that of plants cultured on ZEA-containing medium that showed the lowest FW per cm-2. These results are discussed in terms of the optimization of the DNA extraction for PCR analysis and of the effects of both the environment and the cytokinin type used in vitro on plant leaf tissues.