Terapia celular mediante precursores gabaérgicos y su aplicación en encefalopatías infantiles

Abstract

El desarrollo de la terapia celular proporciona nuevas alternativas para el tratamiento de muy diversas neuropatologías, incluida la epilepsia y más en concreto las Encefalopatías epilépticas infantiles (EEIs). A día de hoy, los protocolos de actuación contra la mayoría de las EEIs se basan en la cirugía o el tratamiento con fármacos, cuya aplicación se ve limitada por el alto índice de farmacorresitencias, sus efectos secundarios indeseables y los problemas psicomotores que puede ocasionar una cirugía en los niños. La gran mayoría de los casos de EEIs se producen por alteraciones en el sistema GABAérgicos o en la correcta migración de sus precursores, debido en muchos casos a la existencia de diferentes tipos de mutaciones en factores de transcripción clave, como por ejemplo ARX o LHX6. El objetivo principal de la presente Tesis doctoral ha sido estudiar si los trasplantes de precursores GABAérgicos derivados de la Eminencia ganglionar media (MGE) son capaces de revertir total o parcialmente los fenotipos inherentes a dos modelos de EEIs, como son el de Síndrome de West (causado por mutaciones en Arx) [8]y en otro de encefalopatía juvenil causado por una expresión hipomórfica de Lhx6. La tercera parte de la Tesis doctoral ha sido el desarrollo de protocolos de criopreservación que nos permitan disponer de una fuente permanente de células derivadas de la MGE para cuando sean necesarias, manteniendo sus características de migración, actividad y diferenciación intrínsecas, y sin que se vea afectada la viabilidad celular. Nuestros resultados ponen de manifiesto que las células procedentes de la MGE trasplantadas son capaces de migrar largas distancias desde el punto de inyección ( ¿450 ± 50µm), diferenciarse en los diferentes subtipos de interneuronas (Parvalbuminas (PV), Somastotatinas (SST), Neuropéptidos Y (NpY) y Calbindina (CB) ), substituyendo una pérdida previa de las mismas, lo que logra revertir las alteraciones cerebrales a nivel morfológico, electrofisiológico al reducir la frecuencia de las crisis epilépticas y modular la ritmogénesis cerebral a nivel del espectro de ondas evaluado mediante EGG y los comportamientos anómalos como ansiedad e hiperactividad en los animales modelo analizados mediantes las pruebas de campo abierto y laberinto elevado en cruz, pese a desarrollarse los precursores en un ambiente anómalo. Además hemos sido los primeros en realizar este tipo de trasplante en un modelo de encefalopatía que afecta a ratones neonatos, en donde el trasplante se realiza de forma posterior a la pérdida de interneuronas y problemas psicomotrices inherente de esta patología. En cuanto a los procesos de Criopreservación hemos encontrado que la congelación de la MGE in toto mantiene intactas las características intrínsecas de los precursores GABAérgicos, tanto in vitro como in vivo. Los resultados sugieren fuertemente que el trasplantes de los precursores GABAérgicos derivados de la MGE puede ser una terapia validad para el tratamiento de las EEIs.