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Title

Caracterización funcional de las quinasas AbrC1 y AbrC2 del sistema atípico de dos componentes AbrC de Streptomyces coelicolor

AuthorsRodríguez, Héctor ; Rico, Sergio ; Franco-Echevarría, E.; Yepes, Ana ; Santamaría, Ramón I. ; Díaz, Margarita
Issue Date2014
PublisherSociedad Española de Microbiología
CitationX Reunión de Microbiología Molecular (2014)
Abstract[Introducción]: Los sistemas de dos componentes (SDC) constituyen mecanismos de respuesta a estímulos ambientales ycontrolan la expresión de genes pueden afectar a la síntesis de antibióticos en Streptomyces. En el trabajo presentado se estudió el papel de dos histidína quinasas: AbrC1 (codificada por el gen SCO4598) y AbrC2 (codificada por el gen SCO4597) que junto con el regulador de respuesta AbrC3 (codificado por el genSCO4596) constituyen un SDC atípico que interviene en la regulación de la síntesis de antibióticos. Estos genes están codificados en la cadena negativa del genoma y entre cada gen existe una región intergénica con tamaño suficiente para contener un promotor independiente para cada uno de ellos. [Métodos]: Con el fin de estudiar la participación de ambas quinasas en la regulación de la producción de antibióticos se han obtenido mutantes individuales de cada quinasa así como un mutante de deleción de ambas y se han estudiado sus fenotipos en diferentes medios. Además, se han realizado estudios de expresión de ambos genes en diferentes condiciones mediante q-RT-PCR. Las capacidades fosforilativas de ambas proteínas se ha estudiado indirectamente sobreexpresando el regulador en diferentes cepas (la toxicidad producida por el regulador depende de su nivel de fosforilación) y también fosforilaciones in vitro utilizando para ello fósforo marcado radiactivamente.
[Resultados]: La deleción ΔabrC1 genera una cepa que super produce actinorhodina (ACT) en los medios NB, NMMP y LB y de CDA en medio NA en relación a la cepa silvestre. Sin embargo el mutante de deleción ΔabrC2 y el doble mutante ΔabrC1/C2 mostraron niveles de producción de antibióticos similares a los de esta cepa parental. Los estudios de expresión indican que ambas quinasas se expresan y lo hacen a niveles similares y que son cotranscritas compartiendo un mismo promotor. En cuanto a las capacidades fosforilativas de las quinasas, su capacidad para autofosforilarse ha sido confirmada utilizando fósforo marcado radiactivamente. Además, se observó (indirectamente) que el regulador se encuentra más fosforilado en el mutante simple ΔabrC1. [Conclusiones]: Se ha observado que ambas quinasas son funcionales a nivel transcripcional y capaces de fosforilar al regulador. La eficiencia de la quinasa AbrC2 para fosforilar el regulador es mayor que la de la quinasa AbrC1 (inferida a partir de la producción de antibióticos de los mutantes individuales de las quinasas y la toxicidad derivada de la sobreexpresión del regulador) y ambas son capaces de autofosforilarse, habiéndose identificado en ambas el residuo fosforilable.
DescriptionResumen del trabajo presentado a la X Reunión de Microbiología Molecular celebrada en Segovia del 9 al 11 de junio de 2014.
URIhttp://hdl.handle.net/10261/116358
Appears in Collections:(IBFG) Comunicaciones congresos
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